Raman Microspectroscopy Data Processing

Abstract

Raman microspectroscopy is a powerful tool combining laser scanning confocal microscopy and Raman spectroscopy which is an analytical tech- nique that provides chemical species-specific vibrational spectra or so-called molecular fingerprint of the measured sample - all at once with microscopic resolution. The main problem of processing of the measured data is its time- consuming nature. Therefore, the thesis aims to develop an application that allows automated batch processing of Raman spectral maps in a user-friendly interface. In the first part of the thesis, the theory of implemented method- ological procedures is described in detail, namely, removal of artifacts caused by cosmic radiation hitting the detector, baseline removal due to residual fluorescence of the sample with regard to the complexity of the Raman spec- trum in terms of position and width of bands, and decomposition methods for the analysis of individual spectral components. Special attention was paid to the development of a new algorithm for the removal of cosmic radiation artifacts. Finally, it is also mentioned how the application is used and how it can be extended it by other methods. 1

Ramanova mikrospektroskopie je kombinací laserové skenovací konfokální mikroskopie a Ramanvy spektroskopie, což je chemicky analytická metoda umožňující získat informaci o chemickém složení vzorku na základě jeho vibračních spekter, neboli takzvaného molekulárního otisku, a to s mikro- skopickým rozlišením. Hlavním problémem zpracování naměřených dat je jeho časová náročnost. Cílem této práce je tedy vyvinout aplikaci, která umožní automatizované dávkové zpracování ramanovských spektrálních map v uživatelsky přívětivém rozhraní. V první části práce je detailně popsána teorie implementovaných metodických postupů, a to odstranění artefaktů způsobených kosmickým zářením dopadajícím na detektor, odečítání pozadí v důsledku zbytkové fluorescence vzorku s ohledem na komplexní průběh Ramanova spektra co do polohy a šířky pásů, a dekompoziční metody pro analýzu jednotlivých spektrálních komponent. Z výše zmíněných byla dále speciální pozornost věnovaná vývoji nového algoritmu k odstranění artefaktů kosmického záření. V poslední řadě je také zmíněno, jak se aplikace používá a jak je možné ji rozšířit o další metody. 1