Opravy DNA v oocytech a preimplantačních embryích

Abstract

Our diploma thesis focused on the effect of hormonal stimulation on DNA integrity of mammals' oocytes. Later, we also focused on its effect on DNA integrity on mammals' embryos and their developmental potential. Maintaining DNA integrity in germ cells is essential for their quality during fertilization and further development. DNA integrity is disrupted by different types of damage, especially by generating DNA double-strand breaks. We examined the DNA damage in mouse oocytes and embryos, dependent on the dose of hormonal stimulation by PMSG hormone. Immunofluorescence detection γ-H2AX, marker of DNA double-strand breaks, on immature GV oocytes confirmed our primary hypothesis that increasing hormonal stimulation dose increases the number of DNA double-strand breaks. We performed the same experimental design in old mice, but there was no significant difference between groups as it was between groups in young mice. We observed a slight delay in meiotic maturation in hyperstimulated mice using live-cell microscopy compared to the control. In mature MII oocytes, we detected a 3-fold increase in γ-H2AX fluorescence intensity. This difference disappeared in fertilized zygotes, where all γ-H2AX foci were present only in the male pronucleus in both, control and hyperstimulated groups. In terms of...

V diplomové práci jsme se zaměřili na vliv hormonální stimulace na integritu DNA savčích oocytů. Později jsme se také věnovali jejímu vlivu na integritu DNA savčích embryí a jejich vývojový potenciál. Udržení integrity DNA v pohlavních buňkách je klíčové pro jejich kvalitu při oplození a další vývoj po oplození. Integrita DNA je ohrožována různými druhy poškození, zejména pak vznikem DNA dvouřetězcových zlomů. V práci jsme zkoumali DNA poškození myších oocytů a raných embryí v závislosti na dávce hormonální stimulace pomocí hormonu PMSG. Imunofluorescenční detekce γ-H2AX, markeru pro DNA dvouřetězcové zlomy, v nezralých GV oocytech nám potvrdila primární hypotézu, že se se zvyšující dávkou hormonální stimulace zvyšoval počet DNA dvouřetězcových zlomů. To samé jsme provedli také u starých myší, kde mezi skupinami nebyl signifikantní rozdíl jako tomu bylo mezi jednotlivými skupinami mladých myší. Pomocí mikroskopie živých buněk jsme zaznamenali mírné časové zpoždění v meiotické maturaci u oocytů z hyperstimulovaných myší oproti kontrole. Ve zralých MII oocytech byl také pozorován trojnásobný nárůst intenzity γ-H2AX fluorescence. Tento rozdíl mizí v oplozených zygotách, kde byly jak v kontrolní, tak hyperstimulované skupině přítomné γ-H2AX foci jen v samčím prvojádře. Z hlediska vývojového potenciálu...