Characterization of RPG1, the large subunit of the yeast S. cerevisiae initiation translation factor 3 (eIF3)

Abstract

Characterization of RPG1, the Large Subunit of the Yeast S. cerevisiae Initiation Translation Factor 3 (elF3). Dissertation for the attainment of the academic degree Doctor of Natural Sciences at the Formal and Natural Sciences Faculty of the University of Vienna submitted by Mag. Leoš Valášek Vienna, September 1998 ABSTRACT Eukaryotic initiation factor 3 (eIF3) consists of at least eight subunits and plays a key role in the formation of the 43S preinitiation complex by dissociating 40S and 60S ribosomal subunits, stabilizing the ternary complex and promoting mRNA binding to 40S ribosomal subunits. The product of the S. cerevisiae RPG1 gene has been described to encode a protein required for passage through the G1 phase of the cell cycle and to exhibit significant sequence similarity to the largest subunit ofhuman eIF3. Here I show that under non-denaturing conditions, Rpg1p copurifies with a known yeast eIF3 subunit, Prt1p. An anti-Rpg1p antibody co-immunoprecipitates Prt1p, and an antibody directed against the Myc-tag of a tagged version of Prt1p co- immunoprecipitates Rpg1p demonstrating that both proteins are present in the same complex. The integrity of this complex is not influenced by the increased temperature in the background of a rpg1-1 temperature sensitive mutant strain. A cell-free translation...

Charakterizace RPG1, velké podjednotky kvasinek S. cerevisiae iniciačního translačního faktoru 3 (elF3). Disertační práce pro získání akademického titulu Doktor přírodních věd na Fakulta formálních a přírodních věd Vídeňské univerzity předložil Mag. Leoš Valášek Vídeň, září 1998 ABSTRAKT Eukaryotický iniciační faktor 3 (eIF3) se skládá z nejméně osmi podjednotek a hraje klíčovou roli při tvorbě preiniciačního komplexu 43S tím, že disociuje ribozomální podjednotky 40S a 60S, stabilizuje ternární komplex a podporuje vazbu mRNA na ribozomální podjednotky 40S. Bylo popsáno, že produkt genu RPG1 S. cerevisiae kóduje protein potřebný pro průchod fází G1 buněčného cyklu a vykazuje významnou sekvenční podobnost s největší podjednotkou lidského eIF3. Zde ukazuji, že za nedenaturačních podmínek Rpg1p ko-purifikuje se známou kvasinkovou podjednotkou eIF3, Prt1p. Protilátka proti Rpg1p ko-imunoprecipituje Prt1p a protilátka namířená proti Myc-značce označené verze Prt1p ko-imunoprecipituje Rpg1p, což dokazuje, že oba proteiny jsou přítomny ve stejném komplexu. Integrita tohoto komplexu není ovlivněna zvýšenou teplotou na pozadí teplotně citlivého mutantního kmene rpg1-1. Bezbuněčný translační systém odvozený z tohoto teplotně citlivého mutantního kmene rpg1-1 se inkubací při 37 řC inaktivuje a jeho aktivitu lze obnovit...