Exprese a lokalizace integrinů alfa V a alfa 3 v samčích germinálních buňkách u vybraných druhů savců

Abstract

Integriny jsou transmembránové glykoproteiny zprostředkující adhezi buněk a jejich komunikaci s extracelulární matrix. Přítomnost integrinových podjednotek byla popsána nejen na somatických buňkách, ale i na oocytech a spermiích. V plazmatické membráně vajíčka se integriny společně s dalšími proteiny z rodiny tetraspaninů podílejí na formování rozsáhlých molekulárních sítí. Obdobné struktury byly v posledních letech odhaleny i na spermii. Zatímco úloha integrinů na vajíčku byla v minulosti intenzivně studována, o přítomnosti a funkci těchto molekul na spermii se toho ví mnohem méně. V rámci této diplomové práce jsme se zaměřili na studium exprese a lokalizace integrinu alfa V a alfa 3 na akrozom-intaktních spermiích a porovnali vzájemné mezidruhové rozdíly u myši, kance a člověka. U integrinu alfa V jsme dále popsali změny v jeho lokalizaci po akrozomální reakci, která je důležitou součástí maturace spermií. Pomocí konfokální mikroskopie jsme integrin alfa V na akrozom-intaktních spermiích u všech námi studovaných druhů lokalizovali v oblasti akrozomu, a po akrozomální reakci jsme detekovali jeho přesun do postakrozomální oblasti a do ekvatoriálního segmentu. Použití imunodetekce ukázalo klesající expresi integrinu alfa V u kapacitovaných a akrozom- zreagovaných spermií. Integrin alfa 3 byl na...

Integrins are transmembrane glycoproteins mediating cell-cell adhesion and ensuring communication between extracellular matrix and cell cytoskeleton. The presence of integrin subunits has already been described on somatic cells, as well as on oocytes and sperm cells. In oocyte plasma membrane, integrins together with tetraspanins are involved in the formation of vast molecular webs. Analogical structures have been recently discovered in sperm plasma membrane as well. While the role of integrins on oocyte has been researched quite extensively, there is much less known about its presence and function on sperm. This Master's thesis focuses on expression and localization of integrins alpha V and alpha 3 on acrosome-intact sperm and its comparison between mouse, pig and human sperm cells. Furthermore, this thesis also describes relocation of the alpha V integrin after the acrosome reaction, which is an essential step of sperm maturation. Using confocal microscopy, the alpha V integrin localization was detected in acrosomal cap area of acrosome-intact sperm of all selected species. After acrosome reaction, the alpha V integrin relocated and was depicted in postacrosomal region and equatorial segment of acrosome-reacted sperm. Immunodetection revealed a decreasing expression of the alpha V integrin in...