Využití metody interspecifické ICSI pro hodnocení kvality uchovávaného biologického materiálu genetických zdrojů

Abstract

Intracytoplasmatická injekce spermie, neboli ICSI, je metoda běžně používaná v centrech asistované reprodukce a zároveň je efektivním nástrojem pro výzkum oplození. Metoda interspecifické ICSI je vhodná pro produkci zygot, které vznikají spojením gamet odlišného, vzdáleně nepříbuzného druhu. Dokáže obejít přirozené mezidruhové bariéry a vytvořit tzv. interspecifické zygoty. Toho se dá využít při hodnocení vlastností gamet ohrožených druhů živočichů. V této práci byla metoda použita pro hodnocení kvality uchovávaného spermatu kozlů z genetického zdroje kozy bílé krátkosrsté. Cílem práce bylo vyhodnotit vliv kryoprezervace na kvalitu spermatu kozlů, které bylo mražené třemi rozdílnými způsoby na dvou různých chovatelských stanicích. Jako kontrolní skupina sloužilo čerstvě odebrané sperma. Do maturovaných myších oocytů byly injikovány hlavičky xenogenních kozlích spermií. Injikované oocyty se nechaly vyvíjet do stadia zygoty, ve kterých se vytvořilo jak samičí (myší), tak samčí (kozlí) prvojádro. V samčím prvojádře se hodnotilo DNA poškození pomocí imunofluorescenčního barvení protilátkou proti γH2AX, což je marker DNA zlomů. Výsledky získané měřením hladiny intenzity fluorescence γH2AX v paternálních prvojádrech ukazují, že se sledované hodnoty mezi jednotlivými skupinami liší. Nejnižší hodnoty...

Intracytoplasmic sperm injection, or ICSI, is a commonly used method in assisted reproduction centers and is also an effective tool for a fertilization research. The interspecific ICSI is the suitable method for production of zygotes, which are formed by association of gametes of different, distantly unrelated species. It can bypass natural interspecies barriers and create so-called interspecific zygotes. This can be used to evaluation properties of genetic material. In this work, this method was used for evaluation of the quality of stored sperm originating from male goats of the white shorthair goat genetic resource. The aim of this work was to evaluate the effect of cryopreservation on the quality of goat sperm, which was frozen in three different ways at two different breeding stations. Freshly collected semen served as a control group. The heads of xenogeneic goat sperm were injected into mature mouse oocytes. The injected oocytes were allowed to develop to the zygote stage, in which both female (mouse) and male (goat) pronuclei was formed. In male pronuclei, DNA damage was assessed by immunofluorescence staining with anti-γH2AX antibody, a marker of DNA breaks. The results obtained by measuring the level of γH2AX fluorescence intensity in the paternal pronuclei show that the values differ...