Studium struktury a metabolismu spermií savců a ryb ve vztahu k procesu reprodukce

Abstract

4. áVĚR V rámcistudiaspermiíkostnatýcha chrupavčitýchrybby|vytvořenkomp|exníprotoko| optima|izovanýproimunof|uorescenčníznačeníproteinůkapřícha jeseteříchspermií. Tento protoko|'vycházejícíz postupupro imunof|uorescenčníznačenína savčích spermiích,ref|ektujepředevŠímjednoduššía snáze poŠkodite|noustruktururybích spermií.Je tak minima|izovánomoŽnépoškozeníběhemzpracovánívzorkůa vznik nespecifickýchartefaktů,kteréby moh|ynegativněov|ivňovatvýs|edky.Vytvoření vhodnéhoprotoko|upro imunof|uorescenčníznačeníje tak dů|eŽiténejen pro výzkumnéexperimenty,a|ei proap|ikačnívyuŽití'např.při hodnoceníkva|ityspermií' kdyje reprodukovate|nostmetodynezbytná. Při studiu energetickéhometabo|ismu,zajišťujícíhopohyb kapříchspermií,by|a s vyuŽitímspecifickémonok|onálníproti|átkypotvrzenapřítomnostminimá|nědvou isoforem kreatin kinasy (cK)' tvořícíchATP-transportníkyvad|o.Na modeIu demembranizovanýchkapříchspermiíby| prokázánvýznamtohototransportního mechanismua schopnostcytop|asmatickéCK umoŽnitcAMP_nezávis|ouiniciaci f|age|árníhopohybua jeho udÉení.Vdalšíprácizbýváověřitpředevšímhypotézu, zda-lije ú|ohafosfokreatinuv kapříchspermiíchprimárnětransportnínebose jedná předevŠímo energetickézásoby. Studiumspermiíchrupavčitýchryb by|ozaměřeno na strukturuspermiíjesetera ma|éhos vyuŽitímskenovacíhoi...

4. CONCLUSION Duringthe studyof teleosteanand chondrosteanfish spermatozoa,a new complex protocol,optimizedforimmunofluorescencestainingofantigenson carpandsturgeon spermatozoa,was developed lt was derivedfrom the protocolused for the mammalianmodel;however,theprotocolrespectsthesimpleandbreakablestructure offishsperm.Inthisway,possibledamagetospermatozoaduringsamplepreparation is minimizedtogetherwithgenerationof nonspecificartefactswhichcouldinfluence the results.Therefore,it is crucialto createandfollowa suitableprotocolforsemen handlingand immunofluorescencestainingnotonlyforevaluationof semenquality butalsoforexperimentalstudreswhenthereproducibilityofthemethodis essential. In the study of energy metabolismon the model of demembranatedcarp spermatozoa,we provedtheexistenceof PCr shuttleand showedthe localizationof creatinekinaseisoenzymesalongthecarpspermflagellumbytheaidof monoclonal antibody.Moreover,withthe contributionof experimentsusinginhibitionof creatine kinase,we demonstratedthe possibilityof initiationand maintenanceof cAMP- independentflagellarmovementof demembranatedcarpspermatozoaonlyby the componentsofthePCr shuttle The studyof chondrosteanfishwas focusedon thefinestructureand morphologyof sterletspermatozoa,which was examinedby scanningand transmisionelectron...