Diferenciace progenitorů Sertoliho buněk a příprava testikulárních 3D kultur Xenopus tropicalis.

Abstract

Sertoliho buňky jsou jediné somatické buňky nacházející se v přímém kontaktu se zárodečnými buňkami. Tyto buňky jsou významnými mediátory procesů vedoucích k vývoji testikulárního niche během embryonálního vývoje. Jejich role v postnatálních varlatech spočívá v regulaci a výživě zárodečných buněk i v tvorbě imunoprotektivní hematotestikulární bariéry. V laboratoři školitelky byla úspěšně založená kultura představující nezralé Sertoliho buňky odvozené z varlat samce X. tropicalis (XtiSCs). V této práci jsem se zabývala indukcí diferenciace XtiSCs v dospělé Sertoliho buňky. In vitro pokusy nepotvrdily diferenciaci buněk v dospělé Sertoliho buňky po stimulaci různými faktory ani po použití primární kultury z 4- letého samce X. tropicalis. Částečný diferenciační proces byl navozen při použití pre-pubertální myší buněčné linie TM4. Výsledky práce naznačují možný potenciál XtiSCs diferencovat v dospělé SCs. Dále byla v práci testována schopnost testikulárních buněk juvenilních samců X. tropicalis formovat de novo organoidy. In vitro pokusy prokázaly schopnost buněk formovat testikulární organoidy v třívrstevném matrigelu.

Sertoli cells represent the only somatic cell type within the seminiferous tubules with direct contact to germ cells. Sertoli cells significantly contribute to the development of the testicular niche in a male embryo. Their role during postnatal life is in the regulation and nutrition of germ cells and the formation of the blood-testis barrier to protect these cells. In our laboratory, we have been successful in establishing a cell line of X. tropicalis immature Sertoli cells (XtiSCs) derived from juvenile testes of X. tropicalis. The objective of this thesis was to induce the differentiation process of XtiSCs into mature Sertoli cells. In vitro experiments using several factors or primary culture from adult male X. tropicalis did not show any mature markers in differentiated XtiSCs. Another experiment using cell culture derived from pubertal mice was partially successful in the induction of the differentiation process. These results indicate that XtiSCs do have some differentiation potential into mature Sertoli cells. Part of this work was to test the ability of testicular cells isolated from juvenile males of X. tropicalis to form de novo organoids. In vitro experiments were successful when these cells were cultured in a three-layer matrigel.