Rakovinotvorný a metastatický potenciál nádorových buněk s nefunkčním ubikvitinačním komplexem CRL4

Abstract

Ubikvitinační komplex CRL4 (Cullin Ring Ligase) vzbuzuje velkou pozornost z důvodu jeho účasti ve fyziologických a patologických procesech, zejména při vývinu rakoviny. Je popsáno, že Cullin4 a/b proteiny slouží jako onkoproteiny u různých malignit. Vzhledem ke své roli v regulaci rakoviny byly identifikovány léky cílené na CRL4, mezi které patří thalidomid a jeho deriváty inhibující jeden ze substrátových receptorů komplexu, protein Cereblon. Adaptorový protein v CRL4 komplexu - DDB1, který se účastní mimo jiné oprav DNA, má také svou roli v rakovinných onemocněních, ale mechanismus této funkce dosud nebyl zcela objasněn. Předmětem této diplomové práce bylo studium dopadů vyřazení a potlačení funkce CRL4 komplexu v prostatické rakovinné linii LNCaP. Značně variabilní změny v proliferaci a migraci buněk byly pozorovány při ovlivnění funkce komplexu za použití látky thalidomid. Vytvoření buněčné linie LNCaP s podmíněně potlačenou funkcí DDB1 sloužilo ke studiu dynamiky nádorů v myším modelu. Výsledky ukazují, že potlačení funkce DDB1 má inhibující vliv na proliferaci nádorových buněk, ale zvyšuje jejich schopnost invazivity do přilehlých tkání. Úplné vyřazení genu DDB1 v linii LNCaP vedlo k buněčné letalitě. Variabilní a kontextuálně dependentní vlastnosti genu DDB1 v onkogenezi podněcují k dalšímu...

Ubiquitination complex CRL4 (Cullin Ring Ligase) attracts a lot of attention due to its involvement in physiological and pathological processes, especially in the development of cancer. Cullin4 a/b proteins are reported to serve as oncoproteins in various malignancies. Due to their role in the regulation of cancer drugs targeting CRL4 have been identified, including thalidomide and its derivatives inhibiting one of the substrate receptors of the complex, the Cereblon protein. The adapter protein within the CRL4 complex - DDB1, which is involved i.a. in DNA repair, also has a role in cancer. However, the mechanism of this function has not yet been fully elucidated. The subject of this master thesis was to study the effects of elimination and suppression of CRL4 complex functions in the prostate cancer cell line LNCaP. Significantly variable changes in cell proliferation and migration have been observed if the complex functions were affected by thalidomide. The creation of the LNCaP cell line with conditionally suppressed DDB1 function was used to study tumor dynamics in a mouse model. Results show that suppression of DDB1 function has an inhibitory effect on tumor cell proliferation but increases their ability to invade adjacent tissues. Complete deletion of the DDB1 gene in the LNCaP cell line...