Optimalizace CAR T lymfocytů pro imunoterapii hematologických malignit
Optimizing chimeric antigenic receptors (CARs) T-cells for immunotherapy of hematological malignancies
diplomová práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/150867Identifikátory
SIS: 209277
Kolekce
- Kvalifikační práce [19113]
Autor
Vedoucí práce
Oponent práce
Zadražil, Zdeněk
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Imunologie
Katedra / ústav / klinika
Katedra buněčné biologie
Datum obhajoby
13. 9. 2021
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Čeština
Známka
Velmi dobře
Klíčová slova (česky)
Imunoterapie, CAR T buňky, CD19, ALL, CLL1, NFAT, IL-21, hematologické malignityKlíčová slova (anglicky)
Immunotherapy, CAR T cells, CD19, ALL, CLL1, NFAT, IL-21, hematologic malignanciesImunoterapie založená na T lymfocytech exprimujících chimerické antigenní receptory (CAR) se ukázala být velice úspěšnou v léčbě akutní lymfoblastické leukémie (ALL), což vedlo ke snaze vyvinout imunoterapeutické postupy založené na CAR T lymfocytech i pro další hematologické malignity. V současné době je snaha vylepšit modifikace T lymfocytů tak, aby léčba pacientů byla efektivnější. Pokaždé je pak třeba tuto modifikaci empiricky ověřit v pokusech in vitro. Rozhodli jsme se studovat efekt cytokinu IL-21 na protinádorovou funkci CD19 specifických CAR T lymfocytů pomocí in vitro testů. Do T buněk byl vnesen konstrukt, který koexprimoval IL-21 pod kontrolou inducibilního NFAT promotoru společně s CAR proti CD19. V sérii experimentů byly porovnávány vlastnosti těchto buněk po kokultivaci s nádorovými B buněčnými liniemi a buňkami CLL získané od pacientů. Z výsledků vyplývá, že CAR T buňky, které exprimují IL-21, lépe proliferují a lépe se aktivují, a to i po opakované stimulaci leukemickými buňkami. Kromě CARů specifických proti molekule CD19 jsme se zabývali i CARy specifickýmiproti molekule CLL1, která je v literatuře popisována jako jeden ze slibných targetů pro léčbu AML. Připravili jsme CAR T buňky proti CLL1 produkující IL-21. Pro tento účel bylo třeba připravit plazmid, který kromě sekvence pro...
Immunotherapy based on chimeric antigen receptor (CAR)-expressing T lymphocytes has proven to be highly successful in the treatment of acute lymphoblastic leukemia (ALL), leading to development of CAR-based immunotherapies for other hematologic malignancies. Currently, efforts are underway to refine T cell modifications to make patient treatment more effective. Each time, this modification then needs to be empirically validated in in vitro experiments. We decided to study the effect of the cytokine IL-21 on the antitumor function of CD19-specific CAR T cells using in vitro assays. A construct that co-expressed IL-21 under the control of the inducible NFAT promoter together with CARs against CD19 was introduced into T cells. In a series of experiments, the properties of these cells were compared after coculture with tumor B cell lines and CLL cells obtained from patients. The results showed that CAR T cells that express IL-21 proliferate and activate better, even after repeated stimulation with leukemia cells. In addition to CARs specific against the CD19 molecule, we also investigated CARs specific against the CLL1 molecule, which has been described in the literature as one of the promising targets for the treatment of AML. We prepared CAR T cells against CLL1 producing IL-21. For this purpose, we...