Charakterizace proteinů polární trubice mikrosporidií.
Characterization of polar tube proteins of microsporidia.
diploma thesis (DEFENDED)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/150857Identifiers
Study Information System: 207756
Collections
- Kvalifikační práce [20085]
Author
Advisor
Consultant
Petrů, Markéta
Referee
Štáfková, Jitka
Faculty / Institute
Faculty of Science
Discipline
Parasitology
Department
Department of Parasitology
Date of defense
14. 9. 2021
Publisher
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaLanguage
Czech
Grade
Very good
Mikrosporidie jsou vnitrobuněční parazité patřící do skupiny Fungi. Přestože se jedná o diverzifikovanou skupinu organismů napadající široké spektrum hostitelů a tkání, sdílejí naprosto unikátní invazní aparát. Klíčovou organelou tohoto aparátu je polární trubice sloužící k transportu infekční sporoplasmy do hostitelské buňky. Skládá se z PTP proteinů, které jsou hlavním zájmem této diplomové práce. Hlavní úsilí bylo věnováno studiu interakcí dvou hlavních PTP proteinů. Na rozdíl od již publikovaných dat se nám nepodařilo ověřit interakci PTP proteinů za použití kvasinkového dvouhybridního systému. Pokusy s in vitro připravenými proteiny naopak ukázaly na možnou tvorbu homopolymerních komplexů proteinů PTP2 a PTP3 z Nosema bombycis (NbPTP2, NbPTP3). Připraveno bylo několik konstruktů pro expresi rekombinantních proteinů NbPTP2 a NbPTP3 v Escherichia coli. Exprese NbPTP2 byla úspěšná, avšak protein se nepodařilo převést za nativních podmínek do solubilní frakce umožňující jeho následnou purifikaci. Příprava rekombinantního NbPTP3 byla komplikována rychlou tvorbou pravděpodobně degradačních produktů. Proto byl na závěr vytvořen konstrukt umožňující purifikaci intaktního NbPTP3 pomocí dvou purifikačních tagů na N- a C-koncích proteinu. V průběhu diplomového projektu se nám podařilo úspěšně zavést...
Microsporidia is a group of intracellular parasites belonging to Fungi. Even though this group seems to be diverse with great variety of hosts and infected tissues they share completely unique invasion apparatus. A key organelle of this apparatus called the polar tube serves as a conduit for sporoplasm passage into the host cell. It consists of PTP proteins which are the main interest of this diploma thesis. Major effort was devoted to the study of the two main PTP proteins. In contrast to already published data, we were unable to verify the interaction of PTP proteins using a yeast two-hybrid system. On the contrary, experiments with in vitro prepared proteins have shown the possible formation of homopolymeric complexes of PTP2 and PTP3 proteins from Nosema bombycis (NbPTP2, NbPTP3). Several constructs were prepared for the expression of recombinant NbPTP2 and NbPTP3 proteins in Escherichia coli. Expression of NbPTP2 was successful but under native conditions the protein wasn't obtained in soluble fraction allowing its subsequent purification. The preparation of recombinant NbPTP3 was complicated by the rapid formation of presumably degradation products. Therefore, a final construct was made to allow purification of intact NbPTP3 using two purification tags at the N- and C-termini of the protein....