Show simple item record

CFTR-mRNA: the alternative for the gene therapy of cystic fibrosis
dc.contributor.advisorBořek Dohalská, Lucie
dc.creatorPecková, Kateřina
dc.date.accessioned2017-05-31T19:32:23Z
dc.date.available2017-05-31T19:32:23Z
dc.date.issued2016
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11956/1334
dc.description.abstractCystická fibróza je onemocnění, u kterého dochází k mutaci CFTR genu kódujícího stejnojmenný protein, jehož hlavní funkcí je přenos chloridových iontů. K napravení tohoto defektu byla v rámci diplomové práce vybrána genová terapie. Byly syntetizovány dva typy stabilní mRNA obsahující minimálně 200 adeninů na 3' konci, 25 % pseudouridinu, 25 % 5-methylcytidinu a na 5' konci buďto klasickou čepičku (enzymová mRNA) nebo analog čepičky 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G (tzv. ARCA mRNA). Byly použity buněčné linie od zdravých jedinců (NuLi-1) a pacientů trpících cystickou fibrózou s mutací F508del (CuFi-1). Vizualizace CFTR proteinu pomocí optimalizované metody nepřímé imunofluorescence potvrdila zvýšení exprese CFTR proteinu u obou buněčných linií CuFi-1 a NuLi-1, a to jak při použití ARCA mRNA tak při použití enzymové mRNA. Funkčnost CFTR proteinu byla stanovena prostřednictvím fluorescenčního barviva N-(ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxychinolinu (MQAE), kterým byly buněčné linie předem obarveny a které je specificky zhášeno halogenovými ionty. Transport iontů skrze tento kanál byl ověřen použitím CFTR(inh)-172, který specificky tento kanál inhibuje svou vazbou na R doménu. Po 24h transfekci ARCA mRNA buněčné linie CuFi-1 došlo k obnově jeho funkce. V neposlední řadě byla studována adheze bakterií Pseudomonas...cs_CZ
dc.description.abstractCystic fibrosis is a genetic disease caused by mutation of the CFTR gene coding homonymous protein, whose main function is transport of chloride ions. In this thesis, gene therapy was used for correction of this defect. Two types of stable mRNA was synthetised - both contained at least 200 adenines on the 3' end, 25 % of pseudouridine, 25 % of 5-methylcytidine and classical cap (enzyme mRNA) or cap analogue 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G (ARCA cap) on the 5' end. Cell lines isolated from healthy volunteer (NuLi-1) and those from patient suffering from cystic fibrosis with F508del mutation (CuFi-1) were used. The mRNA transfection efficiency was determined using different methods. Increased expression of the CFTR protein was confirmed by visualization of this protein by optimized immunofluorescence method in both cell lines while using both ARCA mRNA and enzyme mRNA. CFTR protein function was studied using fluorescent probe N-(ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinoline (MQAE), which is quenched by halogen ions. CFTR channel ion transport was verified using CFTR(inh)-172. This inhibitor specifically inhibits this channel through binding on the R domain of the CFTR protein. CFTR protein function was restored after 24h transfection of the CuFi-1 cell line by ARCA mRNA. The bacterial adhesion of Pseudomonas...en_US
dc.languageČeštinacs_CZ
dc.language.isocs_CZ
dc.publisherUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakultacs_CZ
dc.titleCFTR-mRNA: alternativa pro genovou terapii cystické fibrózycs_CZ
dc.typediplomová prácecs_CZ
dcterms.created2016
dcterms.dateAccepted2016-09-05
dc.description.departmentDepartment of Biochemistryen_US
dc.description.departmentKatedra biochemiecs_CZ
dc.description.facultyPřírodovědecká fakultacs_CZ
dc.description.facultyFaculty of Scienceen_US
dc.identifier.repId157680
dc.title.translatedCFTR-mRNA: the alternative for the gene therapy of cystic fibrosisen_US
dc.contributor.refereeNosková, Libuše
dc.identifier.aleph002103081
thesis.degree.nameMgr.
thesis.degree.levelnavazující magisterskécs_CZ
thesis.degree.disciplineBiochemiecs_CZ
thesis.degree.disciplineBiochemistryen_US
thesis.degree.programBiochemiecs_CZ
thesis.degree.programBiochemistryen_US
uk.thesis.typediplomová prácecs_CZ
uk.taxonomy.organization-csPřírodovědecká fakulta::Katedra biochemiecs_CZ
uk.taxonomy.organization-enFaculty of Science::Department of Biochemistryen_US
uk.faculty-name.csPřírodovědecká fakultacs_CZ
uk.faculty-name.enFaculty of Scienceen_US
uk.faculty-abbr.csPřFcs_CZ
uk.degree-discipline.csBiochemiecs_CZ
uk.degree-discipline.enBiochemistryen_US
uk.degree-program.csBiochemiecs_CZ
uk.degree-program.enBiochemistryen_US
thesis.grade.csVýborněcs_CZ
thesis.grade.enExcellenten_US
uk.abstract.csCystická fibróza je onemocnění, u kterého dochází k mutaci CFTR genu kódujícího stejnojmenný protein, jehož hlavní funkcí je přenos chloridových iontů. K napravení tohoto defektu byla v rámci diplomové práce vybrána genová terapie. Byly syntetizovány dva typy stabilní mRNA obsahující minimálně 200 adeninů na 3' konci, 25 % pseudouridinu, 25 % 5-methylcytidinu a na 5' konci buďto klasickou čepičku (enzymová mRNA) nebo analog čepičky 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G (tzv. ARCA mRNA). Byly použity buněčné linie od zdravých jedinců (NuLi-1) a pacientů trpících cystickou fibrózou s mutací F508del (CuFi-1). Vizualizace CFTR proteinu pomocí optimalizované metody nepřímé imunofluorescence potvrdila zvýšení exprese CFTR proteinu u obou buněčných linií CuFi-1 a NuLi-1, a to jak při použití ARCA mRNA tak při použití enzymové mRNA. Funkčnost CFTR proteinu byla stanovena prostřednictvím fluorescenčního barviva N-(ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxychinolinu (MQAE), kterým byly buněčné linie předem obarveny a které je specificky zhášeno halogenovými ionty. Transport iontů skrze tento kanál byl ověřen použitím CFTR(inh)-172, který specificky tento kanál inhibuje svou vazbou na R doménu. Po 24h transfekci ARCA mRNA buněčné linie CuFi-1 došlo k obnově jeho funkce. V neposlední řadě byla studována adheze bakterií Pseudomonas...cs_CZ
uk.abstract.enCystic fibrosis is a genetic disease caused by mutation of the CFTR gene coding homonymous protein, whose main function is transport of chloride ions. In this thesis, gene therapy was used for correction of this defect. Two types of stable mRNA was synthetised - both contained at least 200 adenines on the 3' end, 25 % of pseudouridine, 25 % of 5-methylcytidine and classical cap (enzyme mRNA) or cap analogue 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G (ARCA cap) on the 5' end. Cell lines isolated from healthy volunteer (NuLi-1) and those from patient suffering from cystic fibrosis with F508del mutation (CuFi-1) were used. The mRNA transfection efficiency was determined using different methods. Increased expression of the CFTR protein was confirmed by visualization of this protein by optimized immunofluorescence method in both cell lines while using both ARCA mRNA and enzyme mRNA. CFTR protein function was studied using fluorescent probe N-(ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinoline (MQAE), which is quenched by halogen ions. CFTR channel ion transport was verified using CFTR(inh)-172. This inhibitor specifically inhibits this channel through binding on the R domain of the CFTR protein. CFTR protein function was restored after 24h transfection of the CuFi-1 cell line by ARCA mRNA. The bacterial adhesion of Pseudomonas...en_US
uk.file-availabilityV
uk.publication.placePrahacs_CZ
uk.grantorUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, Katedra biochemiecs_CZ
dc.identifier.lisID990021030810106986


Files in this item

Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record


© 2017 Univerzita Karlova, Ústřední knihovna, Ovocný trh 560/5, 116 36 Praha 1; email: admin-repozitar [at] cuni.cz

Za dodržení všech ustanovení autorského zákona jsou zodpovědné jednotlivé složky Univerzity Karlovy. / Each constituent part of Charles University is responsible for adherence to all provisions of the copyright law.

Upozornění / Notice: Získané informace nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora. / Any retrieved information shall not be used for any commercial purposes or claimed as results of studying, scientific or any other creative activities of any person other than the author.

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
Theme by 
@mire NV