Elektroforetické stanovení sacharidů v nektaru z květů

Abstract

Tato práce se zabývá vývojem a základní validací metody stanovení obsahu sacharózy, glukózy a fruktózy v nektaru z květů. Využívá metodu kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí. V teoretické části jsou obecně popsány funkce sacharidů v nektaru, princip kapilární elektroforézy a bezkontaktní vodivostní detekce. Je zde i stručný přehled konkrétních aplikací při stanovování sacharidů. Při experimentální části bylo nejprve otestováno dávkování na dlouhém a na krátkém konci kapiláry. Při dalších experimentech byl optimalizován základní elektrolyt, kde byly vyzkoušeny koncentrace NaOH 10 až 50 mmol l-1 . Optimální podmínky pro experimenty bylo dávkování na kratším konci kapiláry, 40mmol l-1 NaOH jako základní elektrolyt a separační napětí 15 kV. Poté byla ověřena opakovatelnost, mez detekce a stanovitelnosti a také výtěžnost metody s reálným vzorkem nektaru. Jako vnitřní standard byla použita laktóza o koncentraci 0,2 mg ml-1 . Relativní směrodatná odchylka stanovení byla pod 2 %. Hodnoty meze detekce byly pod 0,003 mg ml-1 a hodnoty stanovitelnosti byly pod 0,009 mg ml-1 . Výtěžnost metody byla 97-105 %. Dále byla proměřena kalibrace, ze které byl stanoven obsah jednotlivých sacharidů ve vzorku. Původní vzorek obsahoval 1,204 ± 0,011 mg (n = 3, 0,1 %) sacharózy, 0,341 ± 0,009 mg (n =...

This work deals with the development and basic validation of a method for determination of sucrose, glucose and fructose content in floral nectar. It uses capillary zone electrophoresis with contactless conductivity detection. The theoretical part describes the functions of carbohydrates in nectar, principles of capillary zone electrophoresis and contactless conductivity detection. There is also a brief overview of applications in the determination of carbohydrates. In the experimental part, sample injection at the short and at the long end of capillary were tested. In further experiments, the background electrolyte was optimized. The tested concetrations of NaOH were from 10 to 50 mmol l-1 . Optimal conditions for the experiments were injection at the short end of the capillary, 40mmol l-1 NaOH as background electrolyte and separation voltage of 15 kV. Then, the repeatability, limit of detection and quantification and recovery of the method with a real sample of nectar were verified. Lactose was used as an internal standard. Relative standard deviation was below 2 %. Limits of detection were below 0.003 mg ml-1 and limits of quantification were below 0.009 mg ml-1 . Recovery of the method was 97-105 %. Furthermore, the calibration dependences were measured, from which the concentration of...