Vývoj UHPLC-MS/MS metody pro stanovení ciprofloxacinu a jeho čtyř metabolitů v krysím séru

Abstract

Diplomová práce se zaměřuje na vývoj metody pomocí ultra vysokoúčinné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrii (UHPLC-MS/MS) pro stanovení ciprofloxacinu a jeho metabolitů (desethylenciprofloxacinu, formylciprofloxacinu, oxociprofloxacinu a sulfociprofloxacinu) v biologické matrici. V rámci této práce bylo optimalizováno nastavení hmotnostního spektrometru a byla optimalizována chromatografická separace. Nalezené optimální parametry jsou následující: chromatografická kolona ACE® Excel® C18-Amide (100 mm × 2,1 mm; 1,7 μm), Advanced Chromatography Technologies, Skotsko. Jako mobilní fáze (MF) byla zvolena směs 5 mmol l-1 pufru mravenčanu amonného o pH 3 (složka A) a methanolu (složka B) za gradientové eluce. Průtok MF byl 0,5 ml min-1 , nástřik 1 μl, celková doba analýzy 12 minut, teplota na dávkovači 15 řC, teplota kolony 40 řC. Byly sledovány následující MRM přechody v pozitivním režimu: ciprofloxacin a sulfociprofloxacin: 332,1/314,1 (Q1: -12 V, CE: -21 V, Q3: -22 V), desethylenciprofloxacin: 306,2/288,2 (Q1: -15 V, CE: -19 V, Q3: -30 V), oxociprofloxacin: 346,1/328,1 (Q1: -17 V, CE: -20 V, Q3: -23 V), formylciprofloxacin: 360,1/342,1 (Q1: -18 V, CE: -21 V, Q3: -23 V) a pro sulfociprofloxacin byl sledován MRM přechod také v negativním režimu: 410,1/366,1 (Q1: 30 V, CE: 23 V,...

This diploma thesis is focused on the development of a ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method (UHPLC-MS/MS) for the determination of ciprofloxacin and its metabolites (desethylenciprofloxacin, oxociprofloxacin, formylciprofloxacin and sulfociprofloxacin) in biological matrix. In this work, the settings of the mass spectrometer and chromatographic separation were optimized. The optimal conditions were as follows. Chromatographic column ACE® Excel® C18-Amide (100 mm × 2.1 mm; 1.7 μm), Advanced Chromatography Technologies, Scotland. Mobile phase composed of 5 mmol l-1 ammonium formate buffer pH 3 (component A) and methanol (component B) under gradient elution. Flow rate was 0.5 ml min-1 , injection volume 1 μl, analysis time 12 minutes, autosampler temperature 15 řC and column temperature 40 řC. The following MRM transitions at positive mode were monitored: ciprofloxacin and sulfociprofloxacin: 332.1/314.1 (Q1: -12 V, CE: -21 V, Q3: -22 V), desethylenciprofloxacin: 306.2/288.2 (Q1: -15 V, CE: -19 V, Q3: -30 V), oxociprofloxacin: 346.1/328.1 (Q1: -17 V, CE: -20 V, Q3: -23 V), formylciprofloxacin: 360.1/342.1 (Q1: -18 V, CE: -21 V, Q3: -23 V) and for sulfociprofloxacin MRM transition at negative mode was also monitored: 410.1/366.1 (Q1: 30 V, CE: 23 V, Q3: 24 V)....