Fluorescenčně značené ligandy μ-opioidních receptorů

Abstract

Tato bakalářská práce se zabývá přípravou fluorescenčně značených opiátů, které umožňují pomocí fluorescenčních technik detekovat µ-opioidní receptory a blíže prostudovat interakci s jejich ligandy. Jako substráty určené k chemickým modifikacím byly vybrány semi-syntetické opiáty naloxon a naltrexon. Jejich převedení na odpovídající C-6 hydrazony umožnilo sloučeniny dále modifikovat a sledovat, zda-li dojde ke změně jejich schopnosti se vázat na µ-opioidní receptory. Nejprve byly připraveny známé adukty hydrazonů s isothiokyanátem fluoresceinu. Následně byly mezi uvedenou fluorescenční značku a opiátový fragment systematicky vkládány různě dlouhé spojky. Tyto spojky byly připraveny z tetraethylenglykolu s cílem sledovat změnu vazebné konstanty takto upraveného ligandu opioidního receptoru. Nakonec bylo rozhodnuto připravit konjugát, který by byl opatřen spojkou odpovídající svým rozměrem zhruba délce dekaethylenglykolu. K tomu byly navrženy dva syntetické postupy konstrukce požadované spojky. Jeden využil přístup splňující podmínky click chemie a druhý byl založen na klasické tvorbě amidu. Oba úspěšně připravené konjugáty byly převedeny na adukty s fluoresceinem, což umožnilo ověřit jejich vazbu s receptorem. Obě látky byly také poskytnuty druhému spolupracujícímu pracovišti, jež je použije k...

This Bachelor's thesis deals with preparation of fluorescently labeled opiates, which allow detection of µ-opioid receptors and study of their interaction with ligands, using fluorescent techniques. As substrates designated for chemical modifications were chosen semi-synthetic opiates, naloxone and naltrexone. Their conversion to corresponding C-6 hydrazones allowed further modifications of these substances and tracking, if any changes to their ability to interact with µ-opioid receptors ocurr. Firstly, known adducts of these hydrazones with fluorescein isothiocyanate were prepared. Then, we inserted linkers of different lengths between the opiate fragment and the fluorescent tag, systematically. Mentioned linkers were prepared from tetraethyleneglycole derivatives with aim to study binding constants of modified µ-opioid receptor ligands. In the end, we decided to prepare opiate conjugate with particular linkers of length corresponding, approximately, to decaethyleneglycole. Two different procedures were proposed for the preparation of this linker. One of them used click chemistry concept and the other was based on classic amide coupling. Both conjugates were converted to adducts with fluorescein to verify their specific binding to µ-opioid receptors. They were also provided to co-operating group,...