Studium regeneračního potenciálu progenitorů Sertoliho buněk u pulců Xenopus tropicalis po amputaci ocasu.

Abstract

African clawed frogs (Xenopus) represent an ideal model organism for study of regeneration mechanisms. In frogs, complete regeneration occurs in the tadpole stage. In later stages the regeneration capacity is lost. The Laboratory of Developmental biology was successful in establishment of cell culture called Xenopus tropicalis immature Sertoli cells (XtiSCs) derived from X. tropicalis testes. These cells are common progenitors of Sertoli cells and peritubular myoid cells. XtiSCs show similar characteristics as mesenchymal stem cells. MSCs hold interest of scientists for their immunomodulatory properties and multipotent differential and regeneration potential. In this thesis, we studied regeneration and migration potential of XtiSCs after X. tropicalis tadpole's tail amputation in developmental stage 47 - 50. Transgenic XtiSCs culture expressing RFP was prepared to facilitate transplantation experiments. Transplantation experiments showed preferential migration of XtiSCs into the site of injury. XtiSCs transplantations in X. laevis tadpoles with downregulated NO synthases eNOS and nNOS revealed their migratory dependence on nitric oxide signalization. Imunocytochemical staining of XtiSCs in vitro showed positive iNOS, nNOS and Pax7 expression. Imunohistochemical staining of tadpole's tail vibratome...

Žáby rodu Xenopus představují ideální modelový organismus pro studium regeneračních procesů. U žab lze kompletní regeneraci pozorovat ve stádiu pulce. V pozdějších stádiích vývoje je tato schopnost ztracena. V Laboratoři vývojové biologie se podařilo založit buněčnou kulturu společných progenitorů Sertoliho a peritubulárních myoidních buněk (XtiSC) odvozenou z varlat samce X. tropicalis. Tyto buňky vykazují obdobné charakteristiky jako mesenchymální kmenové buňky, jež jsou v současné době předmětem zájmu mnoha vědců pro své imunomodulační vlastnosti a multipotentní diferenciační a regenerační potenciál. V této práci byl studován regenerační a migrační potenciál XtiSC po amputaci ocasu u pulců X. tropicalis ve stádiu 47 - 50. Pro usnadnění transplantačních experimentů byla vytvořena transgenní linie XtiSC exprimující RFP. Pomocí transplantačních experimentů pak byla potvrzena preferenční migrace XtiSC do místa zranění. S využitím pulců X. laevis s vyřazenou funkcí NO syntáz eNOS a nNOS bylo rovněž zjištěno, že migrace XtiSC do místa zranění je zprostředkována signalizací oxidu dusnatého. Imunocytochemickým barvením XtiSC in vitro byla zjištěna pozitivní exprese iNOS, nNOS a Pax7. Imunohistochemické barvení vibratomových řezů ocasu pulců s transplantovanými XtiSC potvrdilo částečnou kolokalizaci...