Analýza argininu a jeho methylovaných derivátů v klinických vzorcích pomocí LC-MS/MS

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Uchazeč: Bc. Pavel Prokop, DiS. Školitel: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: Analýza argininu a jeho methylovaných derivátů v klinických vzorcích metodou LC-MS/MS Asymetrický dimethylarginin (ADMA) a jeho enantiomer, symetrický dimethylarginin (SDMA), jsou přirozeně se vyskytující aminokyseliny, které vznikají intracelulárně z L-argininu. ADMA je endogenním kompetitivním inhibitorem synthasy oxidu dusnatého. Zvýšené hladiny ADMA a SDMA jsou spojovány s endoteliální dysfunkcí, hypertenzí, kardiovaskulárními a renálními onemocněními. Obě látky se u pacientů s chronickým renálním onemocněním (CKD) hromadí. Cílem této diplomové práce bylo zavedení a validace metody na stanovení L-argininu, ADMA a SDMA v lidské plazmě pomocí ultravysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS). LC-MS/MS metoda byla následně porovnána s enzymovou imunoanalýzou na imunosorbentech (ELISA) a metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí (HPLC-FL). Chromatografická separace probíhala za použití kapalinového chromatografu Dionex UltiMate 3000 UHPLC, následovala hmotnostní detekce na hmotnostním spektrometru amaZon SL. Jako interní standardy byly...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Pavel Prokop, DiS. Supervisor: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Title of diploma thesis: Analysis of arginine and its methylated derivatives in clinical samples using LC-MS/MS Asymmetric dimethylarginine (ADMA) and its enantiomer, symmetric dimethylarginine (SDMA), are naturally occurring amino acids that are generated intracellularly from L-arginine. ADMA is an endogenous competitive inhibitor of nitric oxide synthase. Increased levels of ADMA and SDMA are associated with endothelial dysfunction, hypertension, cardiovascular and renal diseases. Both compounds are accumulating in chronic kidney disease (CKD) patients. The aim of this diploma thesis was to develop and validate a liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for the determination of L-arginine, ADMA and SDMA in human plasma. Subsequently, LC-MS/MS method was compared with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and high-performance liquid chromatography with fluorescence detection (HPLC-FL) method. Chromatographic separation was performed on Dionex UltiMate 3000 UHPLC liquid chromatograph, followed by tandem mass spectrometric detection on amaZon SL mass spectrometer. L-Arginine-13 C6, ADMA-d6 and...