Vliv NADPH:cytochrom P450 reduktasy a cytochromu b5 na metabolismus vandetanibu cytochromem P450 3A5

Abstract

Léčba rakoviny je možná několika způsoby. Jedním z nich je chemoterapie, kdy se onkologickým pacientům podává cytostatikum nebo kombinace více druhů léčiv. Cílem této bakalářské práce bylo studium a rozšíření poznatků o metabolismu protinádorového léčiva vandetanibu. Vandetanib je tyrosinkinasový inhibitor, který se od roku 2012 používá v Evropě na léčbu symptomatické nebo progresívní medulární rakoviny štítné žlázy. V předkládané bakalářské práci byla studovaná kinetika oxidace vandetanibu cytochromy P450 3A5. Byla studovaná oxidace dvěma různými systémy, jako první byly použité rekombinantní cytochromy P450 3A5 exprimované v hmyzích buňkách transfekovaných Baculovirem (SupersomyTM ) a jako druhé byly použité lidské rekombinantní cytochromy P450 3A5 exprimované v buňkách E.coli (Bactosomy). Dále byl studován vliv NADPH:CYP reduktasy a cytochromu b5 na oxidaci vandetanibu tímto cytochromem. Oba systémy tvořili demethylovaný metabolit vandetanibu, N-desmethylvandetanib, který byl separovaný pomocí metody HPLC. Studium enzymové kinetiky oxidace vandetanibu katalyzované rekombinantními lidskými CYP3A5R, 3A5BR, 3A5BLR u Bactosomů signalizuje, že do aktivního místa enzymu se mohou vázat dvě molekuly vandetanibu, což vede k efektivnější oxidaci. Získané výsledky také naznačují, že na oxidaci vandetanibu...

There are several ways for cancer treatment. One of them is chemotherapy, when cancer patients are given a cytostatic or a combination of multiple types of drugs. The aim of this bachelor thesis was to study the metabolism of the anticancer drug vandetanib. Vandetanib is a tyrosine kinase inhibitor, that has been used in Europe since 2012 for treatment of symptomatic or progressive medullary thyroid cancer. The kinetics of vandetanib oxidation by cytochromes P450 3A5 was studied in this thesis. Oxidation was investigated by two different systems. The first were recombinant cytochromes P450 3A5 expressed in baculovirus-transfected insect cells (SupersomesTM ) and the second were human recombinant cytochromes P450 3A5 expressed in E.coli cells (Bactosomes). Furthermore, the effect of NADPH:CYP reductase and cytochrome b5 on vandetanib oxidation was investigated. Both systems formed the demethylated metabolite of vandetanib, N-desmethylvandetanib, which was separated by HPLC. The study of enzyme kinetics of vandetanib oxidation by human CYP3A5R, 3A5BR, 3A5BLR in Bactosomes indicates that two vandetanib molecules can bind into the active site of the enzyme, resulting in more efficient oxidation. The results also indicate that not only NADPH: CYP reductase, but also cytochrome b5 affects vandetanib...