Vliv cytochromu b5 na aktivitu cytochromů P450
Effect of cytochrome b5 on activity of cytochromes P450
diplomová práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/119817Identifikátory
SIS: 207860
Kolekce
- Kvalifikační práce [19109]
Autor
Vedoucí práce
Oponent práce
Feglarová, Tereza
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Biochemie
Katedra / ústav / klinika
Katedra biochemie
Datum obhajoby
15. 7. 2020
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Čeština
Známka
Výborně
Klíčová slova (česky)
cytochrom b5, cytochromy P450, benzo[a]pyren, ellipticin, vandetanib, aristolochová kyselina, Sudan IKlíčová slova (anglicky)
cytochrome b5, cytochrome P450, benzo[a]pyrene, ellipticin, vandetanib, aristolochic acid, Sudan IABSTRAKT Cytochrom b5 (CYB5) je hemový protein schopný redukce cytochromů P450 (CYP) nebo jiných enzymů. Jeho regulační schopnost však byla rovněž pozorována i v apo formě, tedy bez přítomnosti hemové prostetické skupiny v aktivním centru. CYB5 je schopný přijetí elektronu z cytochrom b5 reduktasy (CYB5R) nebo cytochrom P450 reduktasy (CYPOR). Samotná CYPOR je redukována NADPH a je rovněž schopná odevzdání elektronu CYP nezávisle na CYB5. CYB5R je naopak redukována NADH. Schopnost CYB5 přijmout a odevzdat elektron byla studována in vitro na pěti různých substrátech - testosteronu, Sudanu I, aristolochové kyselině I (AAI), ellipticinu a vandetanibu. Tyto substráty byly vybrány podle jejich charakteristických reakcí, jež jsou katalyzovány příslušnými isoformami CYP. Experimenty s těmito substráty byly prováděny v prostředí s rekombinantními CYP připravenými v hmyzích buňkách nebo E. coli nebo v prostředí s jaterními mikrosomy izolovanými z různých organismů. Potkani, z nichž byla většina mikrosomů izolována, byly zároveň premedikovány různými induktory CYP. Pro prokázaní schopnosti CYB5 redukovat CYP nezávisle na CYPOR byly experimenty prováděny v prostředí s NADH nebo NADPH. Tímto způsobem byla prokázána schopnost CYB5 a CYB5R sloužit jako zdroj elektronů při metabolismu testosteronu (CYP3A4) a...
ABSTRACT Cytochrome b5 (CYB5) is heme protein capable of reduction of cytochromes P450 (CYP) or some other enzymes. However, his regulative capability was also observed by his apo form, i.e. in absence of heme prosthetic group in the active center. CYB5 can accept electron from cytochrome b5 reductase (CYB5R) or from cytochrome P450 reductase (CYPOR). CYPOR by itself is reduced by NADPH and is also able to forward electron to CYP independently of CYB5. CYB5R on the other hand is reduced by NADH. Efficiency of CYB5 to accept and forward an electron was studied in vitro with five different substrates - testosterone, Sudan I, aristolochic acid I (AAI), ellipticine and vandetanib. These substrates were chosen considering their characteristic reactions, which are catalyzed by their respective isoforms of CYP. The experiments with these substrates were carried out in the medium with recombinant CYPs prepared in insect cells or E. coli or in the medium with hepatic microsomes isolated from different organisms. Rats, from which the majority of these microsomes was isolated, were premedicated by different CYP inducers. The experiments were carried out in medium with NADH or NADPH in order to assess the capability of CYB5 to reduce CYP independently of CYPOR. The capability of CYB5 and CYB5R to act as a...