Analýza buněčné signalizace zprostředkované adaptérovým proteinem Daxx

Abstract

2 Abstract Multifunctional adapter protein and histone chaperone Daxx has been described in nu- merous cellular processes, including the regulation of apoptotic and stress signalling, antiviral response and processes connected to chromatin (e. g. transcription). Its influ- ence on chromatin-related processes is mainly carried out by several associated en- zymes, such as DNA-methyltransferase-1, histone deacetylases and chromatin- remodelling ATPase ATRX. In the complex with ATRX Daxx functions as a chaperone of histone-3.3, maintaining the constitutive heterochromatin e. g. at centromeric and telomeric regions. The main aim of this Thesis was a better understanding of the Daxx cellular functions through identification and functional characterization of its novel interacting proteins. Using the yeast two-hybrid screen, several such new Daxx-interacting proteins were identified. These proteins were mainly nuclear, connected to the regulation of chroma- tin-related processes. More detailed analysis focused on the interaction of Daxx with chromatin-remodelling ATPase Brg1. This interaction was confirmed both in vitro and in the cells, where Daxx and Brg1 associated mainly in high molecular weight pro- tein complexes. These likely chromatin-remodelling complexes contain, in addition to Brg1, several...

1 Abstrakt Multifunkční protein Daxx se jako adaptér či histonový chaperon podílí na značném množství buněčných pochodů zahrnujících regulaci apoptotické či stresové signalizace, antivirové odpovědi, transkripce a dalších pochodů spojených s chromatinem. Procesy, které souvisejí s chromatinem, Daxx ovlivňuje pomocí své interakce s DNA-metyltrans- ferázou-1, histondeacetylázami a s ATPázou remodelující chromatin ATRX. V kom- plexu s ní Daxx působí jakožto histonový chaperon pro histon-3.3, důležitý pro udržo- vání konstitutivního heterochromatinu například v oblasti centromer a telomer. Hlavním cílem této dizertační práce byla hlubší analýza buněčných funkcí proteinu Daxx za pomoci identifikace a funkční charakterizace nových proteinů, které s ním in- teragují. K jejich vyhledání byl použit kvasinkový dvojhybridní systém a výsledkem byla identifikace několika nových interagujících proteinů, převážně jaderných a spoje- ných zejména s regulací chromatinu. Detailněji byla analyzována interakce proteinu Daxx s ATPázou remodelující chromatin Brg1. Ta byla potvrzena jak in vitro, tak i v ži- vých buňkách, kde spolu oba proteiny nejvíce asociovaly v komplexech s vyšší relativní molekulovou hmotností. Tyto předpokládané remodelační komplexy obsahovaly vedle Brg1 i další s ním asociované faktory (BAF)....