Bioaktivní molekuly zapojené do zpracování krve u hematofágních monogeneí čeledi Diplozoidae

Abstract

Monogenea z čeledi Diplozoidae (podtřída Heteronchoinea) jsou krevsající ektoparaziti nacházející se na žábrách kaprovitých ryb. Trávení krve u diplozoidů probíhá intracelulárně v lysozomálním cyklu buněk gastrodermis střeva za přítomnosti peptidáz parazita. Avšak informace o způsobu trávení krve u této skupiny pocházely dosud pouze z ultrastrukturálních a histochemických analýz. Proto jsem se v této práci zaměřila na biochemickou a molekulární charakteristiku vybraných bioaktivních molekul, které by se mohly podílet na zpracování krve dospělci Eudiplozoon nipponicum, a to konkrétně na cysteinové peptidázy typu katepsinů L a B, aspartické peptidázy typu katepsinu D a na inhibitory serinových peptidáz Kunitzova typu. V homogenátech a exkrečně/sekrečních (E/S) produktech dospělců E. nipponicum dominovala aktivita cysteinových peptidáz typu katepsinu L, následovaná aktivitou aspartických peptidáz typu katepsinu D a minoritním podílem aktivity katepsinů B. Hemoglobinolytická aktivita těchto vzorků byla kompletně zablokována inhibitory jmenovaných typů peptidáz. V transkriptomu dospělců E. nipponicum byly objeveny transkripty kódující 10 katepsinů L a pouze 1 katepsin B. Primární struktury kódovaných enzymů byly bioinformaticky a fylogeneticky porovnány. Dva abundantní katepsiny L (EnCL1, EnCL3) byly...

Monogeneans from the family Diplozoidae (subclass Heteronchoinea) are bloodfeeding ectoparasites inhabiting gills of common carp. Digestion of blood in diplozoids is an intracellular process taking place in gut cells within lysosomal cycle in the presence of parasite's peptidases. However, information about the blood digestion comes only from ultrastructural and histochemical analyses. Therefore, I have focused in this work on biochemical and molecular characteristics of bioactive molecules which may participate in blood processing by E. nipponicum adults, especially cysteine peptidases of cathepsin L- and B- types, aspartic peptidases of cathepsin D-type, and Kunitz-type inhibitors of serine peptidases. In homogenates and excretory/secretory (E/S) products of E. nipponicum adults, an activity of cysteine peptidases of cathepsins L-type dominated, followed by an activity of cathepsin D-like aspartic peptidases and a minor cathepsin B-like activity. Inhibitors of the abovementioned peptidase types completely blocked hemoglobinolytic activity in the samples. In the transcriptome of E. nipponicum adults, ten cathepsin L-coding transcripts were found and only one cathepsin B-coding transcript. Primary structures of the encoded enzymes were bioinformatically and phylogenetically compared. Two abundant...