Rekombinantní příprava transkripčního faktoru TEAD1.

Abstract

TEAD1 je jedním ze zástupců rodiny transkripčních faktorů TEAD. Tento transkripční faktor je velmi důležitý např. pro vývoj orgánů. Struktura celého transkripčního faktoru TEAD1 ještě není známa. Je známa struktura TEA vazebné domény, která je důležitá pro vazbu transkripčního faktoru TEAD1 na DNA, a transaktivační domény, na kterou se váží koaktivátory. TEAD1 se váže na DNA a po navázání koaktivátoru působí na transkripci různých genů. Mezi geny, které jsou ovlivňované transkripčním faktorem TEAD1, patří geny řídící buněk. TEAD1 je také posledním článkem Hippo signalizační dráhy, která je v dospělosti aktivní a zabraňuje zvýšenému růstu orgánů. Důležité pro aktivitu transkripčního faktoru TEAD1 jsou posttranslační modifikace, jako je Pro zjištění celé struktury transkripčního faktoru TEAD1 a způsobu, jakým interaguje byl v této práci rekombinantně připraven transkripční faktor TEAD1 expresí buňkách bak . Byly nalezeny vhodné podmínky produkce transkripčního faktoru TEAD1. Rovněž bylo provedeno štěpení histidinové kotvy thrombinem a nakonec byl připravený protein izolován a purifikován.

TEAD1 is one of the members of the TEAD transcription factor family. This transcription factor is very important, for example for development of organs. The structure of the entire TEAD1 transcription factor is not now yet known. Nevertheless, structure of two important domains are known. The TEA binding domain, which is important for the binding of the transcription factor TEAD1 to DNA, and the transactivation domain, to which coactivators bind. TEAD1 binds to DNA and upon coactivator bind it affects the transcription of various genes. Genes, that are affected by the transcription factor TEAD1 includes genes regulating proliferation, differentiation and apoptosis of cells. TEAD1 is also the target of the Hippo signalling pathway, which is active in adulthood and prevents abnormal growth of organs. Important for the activity of transcriptional factor TEAD1 are post-translation modifications, such as palmitoylation and phosphorylation. To discover the entire structure of the transcriptional factor TEAD1 and the way it interacts with DNA, the transcriptional factor TEAD1 was prepared recombinationally by expression in cells of Escherichia coli bacteria. Suitable conditions for production of the transcriptional factor TEAD1 were found and the cleavage of the histidine tag by thrombin was performed....