The culture of limbal and mesenchymal cells on various feeders for their use in ophthalmology.

Abstract

P.Trošan Ph.D. Thesis Abstrakt Deficience limbálních kmenových buněk (LSCD) je onemocnění charakterizované poruchou, nedostatkem či absencí limbálních kmenových buněk zodpovídajících za homeostázu a obnovu rohovkového epitelu. Důsledkem onemocnění je zánět na povrchu oka, neovaskularizace a ztráta transparence rohovky, což může vézt až ke ztrátě vidění. Prakticky jedinou formou léčby je transplantace limbální tkáně nebo kultivovaných limbálních epitelových buněk (LECs) na poškozený povrch oka. Lidská amniová membrána (HAM) je přitom využívaná jako nosič pro kultivaci LECs a uplatňuje se i v léčbě povrchu oka včetně LSCD. Předkládaná dizertační práce se zabývá buněčnou terapií LSCD, zejména inovací kultivačních podmínek pro limbální epitelové buňky a přípravou vhodného nosiče pro přenos buněk na poškozenou rohovku. V průběhu studia jsem použil široké spektrum metod, např. kultivaci různých typů buněk (LECs, mezenchymálních kmenových, amniových epitelových, spojivkových epitelových, pohárkových a 3T3 buněk), imunohistochemii a imunocytochemii, mikroskopii, proliferační testy a testy tvorby kolonií, reverzní transkripční a kvantitativní real- time PCR a statistickou analýzu. Během studia jsem se podílel na přípravě protokolu pro zlepšení kvality kultivace limbálních epitelových buněk bez použití xenogenních...

P.Trošan Ph.D. Thesis Abstract Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a disease characterized by the deficiency of stem cells in the limbus, which are responsible for the homeostasis and renewal of the corneal epithelium. This disorder results in corneal neovascularization, chronical inflammation and opacification, which may lead to loss of vision. The most successful treatment is the transplantation of limbal tissue or cultured limbal epithelial cells (LECs) onto the damaged ocular surface. The human amniotic membrane (HAM) is used as the feeder of the LECs culture, as well as for the LSCD treatment. HAM is also widely used in clinical practice, particularly for the treatment of chronic wounds. This dissertation is particularly concerned on cell therapy for LSCD, on preparation of cells suitable for grafting onto the ocular surface, on the improvement of the LECs culture conditions, and on the preparation of appropriate carrier for the transfer of cells onto the damaged cornea. During my work I have used a wide spectrum of methods, e.g. cell cultures (LECs, mesenchymal stem, amniotic epithelial, conjunctival epithelial, goblet and 3T3 cells), immunohisto- and immunocytochemistry, microscopy, proliferation and colony forming assays, reverse transcription and quantitative real-time PCRs and statistical...