Analýza protilátkové odpovědi u BK virové infekce

Abstract

BK virus je lidský polyomavirus s vysokou prevalencí v populaci. Obvykle je pro svého hostitele neškodný, komplikace působí při imunosupresi, často při transplantacích ledvin, jelikož perzistuje v epiteliálních buňkách ledvin. Exis- tují čtyři subtypy BK viru a zdá se, že je důležité identifikovat, na jaký subtyp je dárce a příjemce ledviny pozitivní. Takové určení subtypově specifických pro- tilátek pomocí jednoduchého testu by mohlo pomoci s eliminací komplikací po transplantaci ledvin. Při předchozím výzkumu byl vytvořen návrh ELISA testu, který by mohl sérologicky rozlišit hlavní BK virové subtypy (I a IV), ale jeho vývoj je komplikován tím, že mezi jednotlivými subtypy BK viru a protilátkami dochází ke křížové reaktivitě. Klíčem k úspěchu může být modifikace antigenu používaného pro ELISA test. Proto bylo cílem této diplomové práce zmapovat významná místa kapsidového VP1 proteinu BK viru, konkrétně ve smyčkách EF a DE, která by se mohla podílet na interakci s protilátkami. Toho bylo dosaženo cílenou mutagenezí v genu pro VP1, v oblasti EF smyčky nebo DE smyčky, kde došlo k záměně nukleotidů pro dvě povrchové aminokyseliny, ve kterých se liší sekvence subtypu I a IV. Výsledkem byl gen pro VP1 subtypu IV mutovaný tak, že sekvence v oblasti EF smyčky byla shodná se sekvencí VP1 subtypu I. Stejný...

BK virus is a human polyomavirus which is highly prevalent in the population. The virus is usually not very dangerous to its host, but it may cause complicati- ons in immunosuppressed patients. These complications commonly appear after kidney transplantation because BK virus persists in kidney epithelial cells. There are four subtypes of BK virus and it might be clinically important to screen for the identity of subtypes in matched pairs of donors and recipients of the kidney. This determination of the subtype specific antibodies by simple test could help to manage complications after the surgery. During previous project the ELISA test that could serologically differentiate between two main BK virus subtypes (I and IV) was designed, but its development is complicated by the fact that there is a strong cross-reactivity between the BK virus subtypes and antibodies. The modification of antigen towards better specificity might be required to succeed. Consequently, the main aim of this diploma thesis was to map important spots of major capsid protein VP1 of BK virus, particulary in EF and DE loops, which could participate in binding of antibodies. This aim was addressed by targeted mutagenesis of the gene coding VP1 protein in the region of the respective loop. Nucleotides coding two surface aminoacids...