Charakterizace nové stacionární fáze v hydrofilní interakční kapalinové chromatografii

Abstract

Předkládaná diplomová práce se zabývá podrobnou charakterizací nové diolové kolony, tj. Torus DIOL určené pro superkritickou fluidní chromatografii, v podmínkách hydrofilní interakční kapalinové chromatografie. Tato stacionární fáze má diolové ligandy vázané na tzv. BEH ("bridged ethylene hybrid") částicích, které umožňují používat stacionární fázi při vysokých teplotách, tlacích a v širokém rozsahu pH, což je výhoda oproti klasickým kolonám se silikagelovým nosičem. Na koloně Torus DIOL byla úspěšně provedena separace směsi pěti fluorovaných pesticidů. Retenční mechanizmus a vliv různých parametrů na retenci byl testován analýzou malých polárních látek (nukleobáze, uridin a jeho deriváty, kyselé, neutrální a bazické látky). Testováním vlivu množství acetonitrilu v mobilní fázi na retenci bylo zjištěno, že se na retenčním mechanizmu podílí jak rozdělování analytu mezi hydratovanou stacionární fázi a mobilní fázi, tak i adsorpce analytu na povrch stacionární fáze. Vliv pH vodné složky mobilní fáze na retenci a separaci analytů byl testován s následujícími pufrujícími roztoky: kyselina mravenčí, pH = 2,1; 10mM octan amonný, pH = 4,7 a pH = 9,5. Získané výsledky ukázaly, že hodnota pH vodné složky mobilní fáze výrazně ovlivňuje retenci pouze kyselých látek v závislosti na jejich hodnotě pKA. S...

The aim of this diploma thesis is detailed characterization of new diol-based column, i.e. Torus DIOL designed for supercritical fluid chromatography, in hydrophilic interaction liquid chromatography. This stationary phase contains diol ligands bonded on BEH ("bridged ethylene hybrid") particles. The BEH sorbent is more stable at high pH, pressure and temperature than conventional silica sorbents. Five fluorinated pesticides were successfully separated on Torus DIOL column. Retention mechanism and effect of different parameters were tested by analysis of small polar compounds (nucleobases, uridine and its derivatives, acidic, neutral and basic compounds). Both partitioning of analytes between an aqueous layer deposited on the surface of the stationary phase and the mobile phase and adsorption of analytes on the stationary phase participate in the retention mechanism. Effect of the mobile phase aqueous part pH was investigated with the following buffering solutions: formic acid (pH = 2.1), 10mM ammonium acetate (pH = 4.7 and pH = 9.5). Obtained results showed that aqueous part pH significantly affects retention of acidic compounds according to their pKA values. Retention of all tested analytes on Torus DIOL column slightly increased with increasing ionic strength of mobile phase. The retention...