Analýza rostlinných galaktolipidů pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie

Abstract

Data dependent RP-HPLC/ESI-MS2 methods have been developed for the analysis of monogalactosyldiacylglycerols (MGDGs) and digalactosyldiacylglycerols (DGDGs). The methods allow the efficient separation of non-oxidised and oxidised galactolipids and their unambiguous characterisation based on their collision induced dissociation (CID) and exact mass measurement. The optimised reversed-phase chromatographic systems are based on a 2.0 mm i.d. Nucleosil C18 column and methanol/water (MGDGs) or acetonitrile/methanol/water (DGDGs) gradients. The oxidised galactolipids eluted before the non-oxidised ones and the retention order of the non-oxidised species was found to follow the equivalent carbon number. The use of exact mass measurement MS was demonstrated to be essential for distinguishing the mass spectra of the oxidised and non-oxidised species and thus for their correct interpretation. The methods were applied for the characterisation of the MGDGs and DGDGs in the leaves of Arabidopsis thaliana and Melissa officinalis.

Pro analýzu monogalaktosydiacylglycerol (MGDG) a digalaktosydiacylglycerol (DGDG) byly vyvinuty metody založené na RP-HPLC/ESI-MS2 s využitím datov závislého skenu. Optimalizací podmínek bylo docíleno efektivní separace oxidovaných i neoxidovaných MGDG a DGDG na kolon Nucleosil C18 s binárním gradientem methanolu s vodou v p ípad MGDG a ternárním gradientem acetonitrilu, methanolu a vody v p ípad DGDG. Nejprve byla pozorována eluce oxidovaných galaktolipid a následovala eluce neoxidovaných galaktolipid , u nichž byla zjišt na souvislost elu ního chování s po tem ekvivalent uhlík . Vzhledem k velké podobnosti fragmenta ních hmotnostních spekter oxidovaných a neoxidovaných galaktolipid byla demonstrována nutnost použití hmotnostního spektrometru s vysokým rozlišením pro správnou identifikaci oxidovaných a neoxidovaných forem MGDG a DGDG. Metody byly použity pro charakterizaci galaktolipid z list husení ku rolního (Arabidopsis thaliana) a medu ky léka ské (Melissa officinalis).