Vliv endokrinních disruptorů na expresi a aktivitu cytochromů P450 2B v modelovém organismu potkana

Abstract

Endocrine disrupting chemicals are compounds that interfere with natural hormones and they are responsible for functional changes which may lead to damage of the endocrine system. Their presence in the environment is associated with a number of diseases whose extent is hard to predict. As endocrine disrupting chemicals, a wide range of exogenous and endogenous compounds is present in the environment. Important exogenous endocrine disrupting chemicals include benzo[a]pyrene (BaP) and 17α-ethinylestradiol (EE2); the female sex hormone 17β-estradiol (E2) can act like endogenous endocrine disruptor. In this thesis, the effect of these three compounds and their combinations on the expression and the activity of rat biotransformation enzymes cytochromes P450 2B is studied. The gene expression was determined by quantitative PCR, the expression of the protein itself was studied using Western blot method and consecutive immunodetection. The results show that CYP2B expression is almost unchanged after BaP premedication, whereas estrogenic compounds, E2, EE2, their combination and their combinations with BaP, significantly decrease the expression. The enzyme activity of CYP2B was also studied in rat liver microsomes using the marker substrate 7-pentoxyresorufin. EE2, E2 and their combination decrease the...

Endokrinní disruptory jsou látky, které interferují s přirozenými hormony a jsou tak odpovědné za funkční změny, které mohou vézt k poškození endokrinního systému. Jejich přítomnost v životním prostředí je spojována s řadou onemocnění, jejichž rozsah je těžko předvídatelný. Jako endokrinní disruptory vystupuje široké spektrum látek exogenního i endogenního původu. Mezi významné exogenní disruptory patří benzo[a]pyren (BaP) a 17α- ethinylestradiol (EE2), jako endogenní endokrinní disruptor se může chovat ženský pohlavní hormon 17β-estradiol (E2). V rámci této práce je studován vliv těchto tří látek a jejich kombinací na expresi a aktivitu biotransformačních enzymů cytochromů P450 z podrodiny 2B v játrech potkanů in vivo. Pomocí kvantitativní PCR byla stanovena genová exprese, míra exprese samotného proteinu byla sledována prostřednictvím metody Western blot a následné imunodetekce. Výsledky ukazují, že po premedikaci BaP se exprese CYP2B téměř nemění, zatímco estrogenní látky, E2, EE2, jejich vzájemná kombinace i kombinace s BaP, expresi výrazně snižují. V jaterních mikrosomech potkanů byla pomocí markerového substrátu 7- pentoxyresorufinu měřena také enzymová aktivita CYP2B. EE2, E2 a jejich kombinace snižují aktivitu CYP2B, BaP naopak výrazně zvyšuje O-dealkylaci 7-pentoxyresorufinu (PROD), a to...