Studium interakce lektin-protilátka pomocí povrchové plasmonové rezonance

Abstract

Cystic fibrosis is an autosomal recessive disease affecting mostly Caucasian race. The disease is caused by mutations in CFTR gene. The most affected organ system is respiratory tract, because the changes lead to insufficient natural defence function of lungs, causing the lungs being susceptible to bacterial infections, which are the most common cause of death of CF patients. Among these bacteria is also Burkholderia cepacia, which causes rapid degradation of pulmonary tissue. Eradication of this bacterial infection is complicated by a number of antibiotic resistances and biofilm formation. Chicken antibodies against bacterial lectins are potential means of preventing bacterial lung infection of patients with CF. Using the affinity chromatography with BC2L-A immobilized column a specific antibody fraction was obtained. The immunoreactivity of the mixed antibodies, affinity purified antibodies and unbounded fraction was compared by ELISA. The comparison of immunoreactivity has emerged that the concentration of the specific antibodies has grown more than 10 times. Interaction of lectin-antibody was studied with SPR method. In the first arrangement, the binding strength of the active lectin to glycosylation of the unbounded fraction antibodies was measured. The dissociation constant of this...

Cystická fibróza je autozomálně recesivní onemocnění, které postihuje zejména europoidní rasu. Je způsobeno mutacemi v CFTR genu, které vedou k poruchám funkce stejnojmenného iontového kanálu. Nejvíce je zasaženo dýchací ústrojí, jelikož změnou podmínek plíce ztrácí přirozenou obrannou funkci a stávají se tak náchylné k bakteriálním infekcím, které jsou nejčastější příčinou úmrtí pacientů s CF. Mezi tyto bakterie se řadí mimo jiné Burkholderia cepacia, která u pacientů s CF způsobuje velmi rychlou degradaci plicní tkáně. Boj s touto bakteriální infekcí komplikuje řada rezistencí vůči antibiotikům a tvorba biofilmu. Potenciálním prostředkem prevence bakteriálních infekcí plic pacientů s CF jsou slepičí protilátky proti bakteriálním lektinům. S využitím afinitní chromatografie na koloně s imobilizovaným lektinem BC2L-A byla získána frakce specifických protilátek. Imunoreaktivita směsné protilátky, afinitně purifikované protilátky a nezachycené frakce byla porovnána metodou ELISA. Z porovnání imunoreaktivity vychází, že došlo k zakoncentrování specifických protilátek více než 10×. Dále byla studována interakce lektin-protilátka pomocí metody SPR. V prvním uspořádání byla měřena síla vazby aktivního lektinu na glykosylace protilátek obsažených v nezachycené frakci. Disociační konstanta této interakce...