Vplyv spinálnej anestézie na mieru poškodenia DNA

Abstract

Background: The human organism is exposed daily to many endogenous and exogenous substances that are the source of oxidative damage. Cell structures, including DNA (deoxyribonucleic acid) in the nucleus are damaged due to high concentrations of these substances and accumulation of oxidative stress in cells. The predominance of these damaging processes may later be responsible for human diseases such as cancer, neurodegenerative diseases or heart failure. In our study, we observed oxidative damage at the DNA level due to spinal anesthesia. Methods: Sample processing was performed by comet analysis. The principle consists in fixation of cells (lymphocytes) in the agarose gel, lysis of cell structures for nucleotide release, incubation with specific enzymes and exposure to electrophoresis. Damaged, negatively charged parts of the DNA in the electric field are directed to the positive charged anode, creating a typical comet shape. For visualization, the gels were stained with ethidium bromide (DNA intercalating dye). Results: We have quantified single-strand breaks, oxidized purines and pyrimidines (use of enzymes to detect specific damages). The results are reported in percentage of DNA in the comet's tail. The principle is to compare the intensity of the comet's tail with the total comet intensity....

Cieľ práce: Ľudský organizmus sa denne podrobuje pôsobeniu mnohých endogénnych a exogénnych látok, ktoré sú zdrojom oxidatívneho poškodenia. Pri vysokých koncentráciách a hromadení oxidačného stresu v bunkách dochádza k poškodeniu ich štruktúr vrátane DNA (deoxyribonukleová kyselina) v jadre. Prevaha tohto poškodzujúceho procesu môže byť neskôr zodpovedná za vznik ľudských chorôb ako je rakovina, neurodegeneratívne ochorenia či srdcové zlyhanie. V našej štúdií sme pozorovali oxidatívne poškodenie na úrovni DNA vznikajúce vplyvom spinálnej anestézie. Metódy: Spracovávanie vzoriek prebiehalo metódou kométovej analýzy. Princíp spočíva vo fixovaní buniek (lymfocytov) v agarózovom gély, lýze štruktúr bunky pre uvoľnenie nukleotidov, inkubácií so špecifickými enzýmami a vystavení pôsobeniu elektrického poľa v procese elektroforézy. Poškodené, negatívne nabité časti DNA v elektrickom poli putujú smerom ku kladne nabitej anóde čím vytvárajú typický kométový tvar. Pre vizualizáciu boli gély zafarbené etídiom bromidom (DNA interkalačné farbivo). Výsledky: Kvantifikovali sme jednoreťazcové zlomy, oxidované puríny a pyrimidíny (použitie enzýmov pre detekciu špecifických lézií). Výsledky sú udávané v percentách DNA vo chvoste kométy. Princípom je porovnanie intenzity chvosta kométy s celkovou intenzitou kométy....