Vývoj metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu v moči pro klinický výzkum

Abstract

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Šestáková Školitel: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu v moči pro klinický výzkum Tato diplomová práce se zabývá vývojem metody pro stanovení 8-hydroxy-2-deoxy guanosinu, 8-hydroxyguanosinu a kreatininu pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Cílem bylo vytvořit optimální chromatografické podmínky pro klinický výzkum. Experimenty byly prováděny na přístroji UHPLC Nexera, (Shimadzu, Japonsko) s hmotnostním spektrometrem LCMS-8030 (Shimadzu, Japonsko). Byly testovány 2 stacionární fáze. K separaci byla použita kolona Meteoric core C18 BIO o rozměrech 4,6 × 50 mm (YMC, Německo) s povrchově porézními částicemi o velikosti 2,7 μm opatřena předkolonou KrudKatcher Ultra 0,5 μm in-line filtr (Phenomenex, Německo). Mobilní fáze byla připravena z vody (pH 3 upravené pomocí kyseliny octové) a methanolu (s přídavkem kyseliny mravenčí - 0,2 mM) v poměru 90 : 10. Teplota byla nastavena na 25 řC, průtok na 0,5 ml/min a nástřik zvolen 4 µl. Po optimalizaci separačních podmínek byla metoda aplikována na biologickou matrici (moč). Vzorky byly upraveny extrakcí na tuhou fázi. Metoda byla validována. Nová metoda bude...

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Veronika Šestáková Supervisor: assoc. prof. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Title of the Diploma Thesis: Method development for determination of 8-hydroxy-2-deoxy guanosine in urine for clinical research This diploma thesis is based on the method development for determination of 8- hydroxy-2-deoxy guanosine, 8-hydroxyguanosine and creatinine using UHPLC. The aim was to develop optimal conditions for clinical research. Experiments were carried out using UHPLC Nexera with mass spectrometer LCMS- 8030, (Shimadzu, Japan). Two stationary phases were tested. The chromatographic separation was achieved using a Meteoric core C18 BIO 4.6 × 50 mm stationary phase with core-shell particles, particle size 2.7 μm (YMC, Germany) secured with a KrudKatcher Ultra 0.5 μm in-line filtr (Phenomenex, Germany). The used mobile phase consisted of water (pH 3 using acetic acid) and methanol (using formic acid 0.2 mM) in the ratio 90:10 (v/v). The temperature was maintained at 25 řC, a flow rate was set at 0.5 mL/min and 4 µl of sample was injected. After optimization of separation conditions, the method was applied to biological material (urine). The samples were prepared using solid-phase extraction. The method...