Karbonylace lidského sérového albuminu glykačními činidly: účinek karbonylreduktasy 1

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Veronika Mazurková Školitel: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Název diplomové práce: Karbonylace lidského sérového albuminu glykačními činidly: účinek karbonylreduktasy 1 Předkládaná diplomová práce se zabývá vznikem karbonylových skupin v molekulách lidského sérového albuminu (HSA) působením vybraných glykačních činidel a schopností enzymu karbonylreduktasy 1 (CBR1) do tohoto procesu zasahovat. V úvodních experimentech jsem se věnovala nalezení vhodných podmínek pro stanovení karbonylových skupin v modelu HSA glykovaného in vitro fruktosou a methylglyoxalem pomocí spektrofotometrických metod a polyakrylamidové gelové elektroforézy za denaturujících podmínek (SDS-PAGE) s následným imunoblotingem. Průběh glykace HSA jsem sledovala rovněž pomocí měření fluoreskujících AGE produktů. Dále jsem zkoumala vliv CBR1 na tvorbu karbonylových skupin u vzorků HSA glykovaných reaktivními karbonylovými sloučeninami fruktosou, methylglyoxalem, glyoxalem a glyceraldehydem. K měření jsem použila metody spektrofotometrické, SDS-PAGE s imunoblotingem a imunochemické stanovení ELISA. CBR1 nebyla za daných podmínek schopná odstranit již vzniklé karbonylové skupiny. Stejně tak schopnost CBR1 snižovat množství...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Veronika Mazurková Supervisor: doc. PharmDr. Iva Boušová, Ph.D. Title of diploma thesis: Carbonylation of human serum albumin by glycation agents: effect of carbonyl reductase 1 This diploma thesis is concerned with a formation of carbonyl groups in the molecules of human serum albumin (HSA) as a result of selected glycation agents activity and the ability of enzyme carbonyl reductase 1 (CBR1) to influence this process. Initial experiments were devoted to find optimal conditions for quantification of carbonyl groups in the model of HSA glycated in vitro by fructose and methylglyoxal using spectrophotometric assays and the sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) with subsequent immunoblotting. The glycation of HSA was monitored also by the measurement of fluorescent AGE products. Then the effect of CBR1 on the formation of carbonyl groups in the samples of HSA glycated with reactive carbonyl compounds fructose, methylglyoxal, glyoxal, and glyceraldehyde was studied. Spectrophotometric assays, SDS-PAGE with immunoblotting and enzyme immunoassay ELISA were employed. CBR1 was not able to remove already formed carbonyl groups under given conditions. Also the...