Vliv analog GLP-1 (glucagon-like peptide-1) na hepatocyty potkana v podmínkách in vitro

Abstract

Bc. Veronika Krejčíková Vliv analog GLP-1 (glucagon-like peptide-1) na hepatocyty potkana v podmínkách in vitro. Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Odborný pracovník v laboratorních metodách Cíl práce: Měřením vybraných parametrů jsme sledovali vliv liraglutidu (LIRA; analoga GLP-1) na nesteatotické (ST-1) a steatotické (HF) hepatocyty potkana v podmínkách in vitro. Dále jsme sledovali jeho případný hepatoprotektivní účinek na buňky poškozené acetaminofenem (APAP). Metody: Jako model pro pokusy jsme využili primární kultury nesteatotických a ztukovatělých hepatocytů potkana izolované z jater samců potkanů kmene Wistar. Steatóza u nich byla navozena podáváním vysokotukové diety (71% energie z tuků) po dobu 6 týdnů. Jako kontroly sloužily potkani krmení standardní dietou (10 % energie z tuků). Hepatocyty byly izolovány dvoustupňovou kolagenázovou perfuzí. Na připravených primárních kulturách jsme testovali vliv LIRA o koncentracích 1, 10 a 100 nmol/l na intaktní, nesteatotické a steatotické, hepatocyty a dále na hepatocyty po působení APAP o koncentracích 2,5; 3,75 a 5 mmol/l. Po 24 resp. 20 hod. inkubaci jsme zjišťovali aktivitu laktátdehydrogenázy (LDH) v kultivačním médiu, viabilitu hepatocytů, produkci albuminu, koncentraci malondialdehydu (MDA) a...

Bc. Veronika Krejčíková The effect of GLP-1 (glucagon-like peptide-1) analogues on rat hepatocytes in vitro. Diploma thesis Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Specialist in Laboratory Methods Background: We observed the effect of liraglutide (LIRA; a GLP-1 analogue) on rat non-steatotic (ST-1) and steatotic (HF) rat hepatocytes in vitro. We also monitored its potential hepatoprotective effect on the cells damaged by acetaminophen (APAP). Methods: As a model for our experiments we used the primary cultures of rat hepatocytes isolated from the liver of male Wistar rats. For isolation of lean and fatty hepatocytes, we used rats fed by standard laboratory diet (10% energy from fat) and high fat diet (71% energy from fat) for 6 weeks. Hepatocytes were isolated by two-step collagenase perfusion. We used LIRA at concentrations of 1, 10 and 100 nmol/l on intact, ST-1 and HF hepatocytes; we also tested effect of LIRA on hepatocytes after exposure to 2.5; 3.75 and 5 mM APAP. After 24/20-hours incubation, we tested the activity of lactatdehydrogenase (LDH) in culture medium, the viability of hepatocytes, production of albumin, and level of MDA and ROS production. Morphological evaluation of cells was performed by using phase microscopy. Results: LIRA at tested concentrations...