Vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoků kofeinu

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Zuzana Saifrová Konzultant: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název rigorózní práce: Vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoků kofeinu Tato rigorózní práce je zaměřena na vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoku kofeinu a kofein-citrátu a její následnou validaci. Jako nečistota byl zvolen teofylin, u nějž bylo pravděpodobné, že by se mohl objevit jako rozkladný produkt vzorku. Z množství dostupných metod analýzy kofeinu pomocí HPLC (viz kapitola 3.6 Rešerše) byla jako výchozí zvolena metoda prováděná za laboratorní teploty (20 ± 5 řC), s mobilní fází MeOH:H2O 40:60 o průtoku 1 ml/min, monolitickou kolonou C18 o rozměrech 100 × 4,6 mm a nástřikem 5 µl. V průběhu vývoje metody došlo jak k úpravě několika podmínek analýzy a složení mobilní fáze, tak ke změně rozměrů chromatografické kolony a charakteru fáze stacionární. Hlavními sledovanými parametry při vývoji metody byla rychlost analýzy a schopnost poskytovat symetrické píky rozlišené na základní linii a rovněž od mrtvého objemu kolony. Výsledná metoda je založena na izokratické eluci s použitím mobilní fáze ACN:pufr o pH 6 v poměru 10:90 o průtoku 0,5 ml/min a chromatografickou kolonou C18, 50 x 4,6 mm o velikosti částic 3µm....

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Mgr. Zuzana Saifrová Supervisor: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Title of Rigorous Thesis: Developement of HPLC method for monitoring stability of caffeine solutions This rigorous thesis is aimed on developement of HPLC method for monitoring stability of caffeine and caffeine citrate solution and its consequent validation. Theophylline was chosen as impurity, because of high possibillity of finding it as a product of decomposition in our sample. After consideration of several available methods for HPLC analysis of caffeine (see chapter 3.6 Research) was chosen following method as initial: analysis was carried out in laboratory temperature (20 ± 5 řC), with mobile phase MeOH:H2O 40:60 with flow 1 ml/min, monolithic column C18, 100 × 4,6 mm and sample was injected in volume of 5 µl. During the developement of method several conditions of analysis and composition of mobile phase were adjusted and also proportions of chromatographic column and character of stationary phase were changed. The main pursued parameters were the speed of analysis and capability of providing symetric resoluted peaks separated from the dead volume. The final method was based on isocratic elution using mobile phase...