Validace HPLC metody stanovení piroxikamu v plasmě s využitím SPME a deproteinace

Abstract

Validace HPLC metody stanovení piroxikamu z plasmy s využitím SPME a deproteinace Rigorózní práce Mgr. Kristýna Kuželová Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv, Heyrovského 1203, Hradec Králové Tématem této rigorózní práce bylo bioanalytické hodnocení piroxikamu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Piroxikam byl izolován z plasmy pomocí SPME a deproteinace. Plasma byla vždy upravena na hodnotu pH 2,5. SPME se skládala z 20 minut sorpce na PDMS/DVB vlákno a 20 minut desorpce do 200 μl methanolu. U druhé metody byl vzorek plasmy deproteinován acetonitrilem, 30 vteřin třepán a následně 5 minut centrifugován při 5 000 G. Poté byl odebrán supernatant, který byl analyzován pomocí HPLC. HPLC analýza probíhala na koloně s reverzní fází C18. Mobilní fáze se skládala z roztoku čištěné vody a acetonitrilu (60:40 v/v), který byl okyselený kyselinou mravenčí na pH 2,5. Průtok mobilní fáze kolonou byl 1 ml/min, teplota byla nastavena na 40řC. Detekce analytu probíhala při 333 nm. SPME i deproteinace byly validovány dle FDA. Sledována byla selektivita, správnost, přesnost, extrakční účinnost, linearita, detekční a kvantitativní limit a stabilita.

Validation of HPLC evaluatoin of piroxicam in plasma using SPME and precipitation Rigorous Thesis Mgr. Kristýna Kuželová Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Kralove, Department of Pharmaceutical Chemistry and Drug Control, Heyrovského 1203, Hradec Králové The purpose of this thesis was bioanalytical evalution of piroxicam using High Performance Liquid Chromatagraphy (HPLC). Piroxicam was isolated from plasma using SPME and protein precipitacion. Plasma was adjusted to pH 2,5. SPME was composed of 20 minutes sorption on PDMS/DVB fiber and 20 minutes desorption into 200 ul of methanol. In the second method the sample of plasma was precipitated with acetonitril, 30 seconds shaked and then 5 minutes centrifuged at 5 000 G. Then the supernatant was removed and analysed with HPLC. HPLC analysis was on the column with reversed phase C18. The mobile phase consist of water and acetonitrile (60:40 v/v), pH of solution was adjusted to 2,5 using the formic acid. The flow rate was 1 ml/min, the temperature was set at 40řC. The detection was carried out at 333 nm. SPME and protein precipitation were validated according to FDA. Specificity, accuracy, precision, recovery, linearity, limit of detection a quantification and stability were monitored.