HPLC metoda pro stanovení testosteronu a její využití v charakterizaci karbonylreduktas

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Tomáš Plucha Školitel: RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Název diplomové práce: HPLC metoda pro stanovení testosteronu a její využití v charakterizaci karbonylreduktas Karcinom prostaty patří mezi nádory závislé na hormonech, proliferace nádorově transformovaných buněk je závislá na aktivaci androgenního receptoru testosteronem. Terapii založenou na snížení koncentrace testosteronu do značné míry komplikuje produkce androgenů přímo v buňkách prostaty. Bylo prokázáno, že se na produkci androgenů se mimo jiných podílí také enzymy redukující karbonylové sloučeniny, především aldo-ketoreduktáza 1C3 (AKR1C3). Cílem práce bylo zavést HPLC metodu pro stanovení testosteronu a s jejím využitím zmapovat schopnost enzymů redukujících karbonylové sloučeniny katalyzovat in vitro reakci, při které vzniká aktivní androgen testosteron z neaktivního prekurzoru androstendionu. Vzorky enzymů byly inkubovány v prostředí androstendionu c = 20-120 µmol/l, po ukončení inkubace byly extrahovány pomocí etylacetátu. Ke stanovení vzniklého testosteronu byla použita HPLC analýza (kolona BDS Hypersil C18, 5µm, 250×4,6 mm, mobilní fáze metanol:voda, 70:30, detekce: DAD při 240 nm). Testovali jsme lidské jaterní subcelulární frakce,...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Tomáš Plucha Supervisor: RNDr. Lucie Škarydová, Ph.D. Title of diploma thesis: HPLC method for determination of testesterone and its use for chatacterization of carbonyl reductases Prostate cancer belong to hormone-dependent tumors, the proliferation of transformed cells is dependent on activation of the androgen receptor by testosterone. Androgen deprivatin therapy is complicated by productin of active androgens directly in prostate cells. It was proved that among other enzymes also carbonyl-reducing enzymes participate in androgen production, especially enzyme aldo-keto reductase 1C3 (AKR1C3). The aim was to develop a HPLC method for the determination of testosterone and use this method for in vitro screening of activity of carbonyl-reducing enzymes in formation of potent androgen testosterone from its inactive precursor androstenedione. Enzyme samples were incubated with androstenedione c = 20-120 µmol/l and after incubation were extracted by ethyl acetate. Testosterone formed during the incubation was determined by HPLC analysis (column BDS Hypersil C18, 5µm, 250×4.6 mm, mobile phase metanol:voda, 70:30, detection: DAD při 240 nm). Samples of human liver subcelular fractions,...