Porovnání separace na různých typech stacionárních fází

Abstract

3 ABSTRAKT Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra analytické chemie Kandidát: Vojtěch Martinek Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Porovnání separace na různých typech stacionárních fází Cílem této práce bylo pomocí HPLC metody porovnat účinnost separace na dvou různých typech stacionárních fází. Testována byla kolona naplněná částicemi s pevným jádrem Ascentis Express C18 (Supelco Analytical) a monolitická kolona Chromolith High Resolution RP-18 endcapped (Merck). Jako mobilní fáze byla použita směs acetonitrilu a vody a jako modelový vzorek byla zvolena směs α-estradiolu, β-estradiolu, estronu, estriolu, ethinylestradiolu a ethylparabenu, který byl použit jako vnitřní standard. Nejprve byly úpravou podmínek separace zjištěny pro každou analytickou kolonu optimální podmínky separace, jejichž výsledné parametry byly porovnány a na jejich základě byl vyvozen závěr o účinnosti kolon. Na základě získaných výsledků bylo zjištěno, že efektivnější separace je schopna dosáhnout kolona Chromolith High Resolution, na jejímž chromatogramu byly píky lépe rozlišeny a která v průběhu analýzy generovala menší zpětný tlak než kolona Ascentis Express C18 a tím pádem umožňuje zvýšením průtokové rychlosti mobilní fáze zkrátit čas analýzy.

4 ABSTRACT Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové, Department of Analytical Chemistry Candidate: Vojtěch Martinek Supervisor: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Comparison of separation using different types of stacionary phases The goal of this diploma thesis was to compare two different stationary phases's efficiency of separation using HPLC method. Tested columns were a column filled with fused-core particles Ascentis Express C18 (Supelco Analytical) and a monolithic column Chromolith High Resolution RP-18 endcapped (Merck). As a mobile phase a mixture of acetonitrile and water was used and as a model sample a mixture of α-estradiol, β-estradiol, estrone, estriol, ethinylestradiol and ethylparaben as an internal standard was tested. Firstly modifications of the conditions of the separation process were discovered and optimal conditions of the separation for each analytical column were compared. According to them a conclusion of the efficiency of the columns was made. Based on the obtained results it was discovered that better results were achieved using the Chromolith High Resolution column, on which chromatograms with more resolved peaks and generating a lower back pressure than the Ascentis Express C18 column were found and so shorter analysis...