Standardizace metodiky pro in vitro stanovení chelatace mědi

Abstract

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology and Toxicology Candidate: Lucie Sedlářová Supervisor: Dr. Přemysl Mladěnka, Ph.D. Title of thesis: Standardization of method for in vitro assessment of copper chelation. Cooper is a trace element, which is essential for many biochemical processes in the human body. Disruption of copper homeostasis can cause a variety of diseases. There are primarily two hereditary diseases associated with copper dyshomeostasis: Wilson's disease, which is linked with the excess of copper in the liver and other tissues, and Menkes disease, which is associated with a lack of systemic copper. In addition, local disturbances of copper play a role also in other diseases (neurodegenerative diseases, tumors, myocardial infarction). The main objective of this experimental work was the standardization of a simple but accurate method for rapid screening of copper chelators, which could be applied for the therapy of systemic or local copper excess in the future. The methodology is based on the spectrophotometric determination of copper in microplates using appropriate indicators, bathocuproindisulfonic acid disodium salt (BCS) and hematoxylin. This thesis has shown that the BCS methodology is able to determine chelation of cupric as...

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Farmakologie a toxikologie Kandidát: Lucie Sedlářová Školitel: PharmDr. Přemysl Mladěnka, Ph.D. Název diplomové práce: Standardizace mědi pro in vitro stanovení chelatace mědi Měď je stopový prvek nezbytný pro mnohé biochemické děje v lidském organismu. Poruchy homeostázy mědi mohou způsobovat celou řadu onemocnění. V prvé řadě jsou to dvě dědičná onemocnění: Wilsonova choroba, která je spojena s přesycením jater a dalších tkání mědí, a Menkesova choroba, která je naopak spojena s nedostatkem systémové mědi. Navíc lokální poruchy mědi hrají roli i u dalších onemocnění patologických stavů (neurodegenerativní nemoci, nádory, akutní infarkt myokardu). Hlavním cílem této experimentální práce byla standardizace jednoduché, ale přesné metodiky pro rychlý screening chelátorů mědi, které by mohly být v budoucnu využívány k terapii systémového i lokálního nadbytku mědi. Metodika vychází ze spektrofotometrického stanovení mědi na mikrotitračních destičkách za použití vhodných indikátorů, disodné soli kyseliny bathocuproindisulfonové (BCS) a hematoxylinu. Tato diplomová práce ukázala, že metodika s BCS je schopna stanovit chelataci jak měďnatých, tak měďných iontů při čtyřech různých pH (4.5; 5.5; 6.8; 7.5) odpovídajících fyziologickým...