Stanovení albendazolu a jeho metabolitů pro studium rezistence helmintů vůči benzimidazolovým anthelmintikům

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikální chemie Kandidát: Monika Belešová Konzultant: Ing. Vladimír Kubíček, CSc. Název diplomové práce: Stanovení albendazolu a jeho metabolitů pro studium rezistence helmitů vůči benzimidazolovým anthelmintikům V této rigorózní práci je popsána HPLC metoda analýzy albendazolu a jeho dvou metabolitů, albendazolsulfoxidu a albendazolsulfonu, v biologických vzorcích. Cílem práce bylo nalézt novou izokratickou metodu pro separaci a stanovení těchto látek na koloně Kinetex PFP, což je kolona plněná core-shell částicemi s pentafluorofenylovou stacionární fází. Na základě předchozích experimentů byla použita mobilní fáze acetonitril+ fosfátový pufr (pH = 7,0). Oxibendazol byl ověřen v roli vnitřního standardu. Detekce všech analytů a vnitřního standardu byla fluorimetrická. V práci bylo optimalizováno složení mobilní fáze a následně provedena validace vyvinuté metody. Výsledky validace dokumentují použitelnost této metody při analýzách biologických vzorků během studia rezistence střevních parazitů vůči albendazolu. Metoda byla úspěšně použita při analýzách reálných vzorků.

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biophysics and Physical Chemistry Candidate: Monika Belešová Consultant: Ing. Vladimír Kubíček, CSc. Title of Thesis: Determination of Albendazole and Its Metabolites for Study of Anthelmintic Resistance An HPLC method suited for analysis of albendazole and two metabolites, i. e. albendazole sulfoxide and albendazole sulfone, in biological samples is described in this rigorous thesis. The aim of this work was to develop a new isocratic method for separation and determination of these substances using a core shell Kinetex PFP column equipped with pentafluorophenyl stationary phase. Based on preliminary experiments a mobile phase of acetonitrile+phosphate buffer (pH = 7.0) was used. Oxibendazole was exploited in the role of internal standard. The analytes and the internal standard were detected by means of a fluorescence detector. In the frame of the work the composition of the mobile phase was optimised and validation of the developed method was carried out. The validation results show the method to be applicable for the analyses of biological samples during intestinal parasite resistance against albendazole. The method was successfully applied to analyse real biological samples.