Vývoj rychlé a citlivé UHPLC-MS/MS metody pro stanovení kyseliny salicylové a jejích derivátů

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Iva Sušánková Školitel: Doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj rychlé a citlivé UHPLC-MS/MS metody pro stanovení kyseliny salicylové a jejích derivátů Cílem diplomové práce byl vývoj metody pro stanovení kyseliny salicylové (SAL) a jejích derivátů, kyselin 2,3- a 2,5- dihydroxybenzoových (DHBA) za použití UHPLC ve spojení s MS/MS. Tato metoda umožní nepřímé stanovení volných hydroxylových radikálů. Vzhledem k vysoké reaktivitě je jejich přímé stanovení je obtížné a nepřesné. Při této nepřímé metodě jsou stanovovány látky, které vznikají adicí hydroxylových radikálů. Příkladem jsou kyseliny 2,3- a 2,5- dihydroxybenzoové, které vznikají adicí radikálů na kyselinu salicylovou. Jedná se o stabilní produkty, které mohou být snadno detekovány a kvantifikovány. Tyto sloučeniny mohou být použity pro in vitro i in vivo stanovení hydroxylových radikálů. Spojení ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC) s tandemovou hmotnostní spektrometrií (MS/MS) poskytuje mnoho výhod: zrychlení analýzy a zvýšení selektivity a citlivosti metody. Byly testovány dvě chromatografické kolony. První, Acquity BEH Shield RP18 , poskytovala nevyhovující výsledky. Druhá, Acquity BEH C18, naopak...

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of analytical chemistry Candidate: Iva Sušánková Supervisor: Doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Title of Doctoral Thesis: The development of fast and efficient UHPLC-MS/MS method for the determination of salicylic acid and its derivatives The aim of this thesis was to develop a rapid method for qualitative and quantitative analysis of salicylic acid (SAL) and its derivatives, 2,3- and 2,5-digydroxybenzois acids (DHBAs) using ultra high performance liquid chromatography (UHPLC) coupled with tandem mass spectrometry (MS/MS). This indirect method can be used to assess hydroxyl radical formation. Due to its high reactivity and a very short lifetime, direct evidence of presence of free radicals has low sensitivity and it is difficult. In this method, hydroxyl radical adducts are measured. Salicylic acid is used as a hydroxyl radical trap, that produces stable products, 2,3- a 2,5- dihydroxybenzoic acids, which can be identified and quantified. These compounds can be used as a sensitive indicator to measure hydroxyl radical formation both in vitro and in vivo. Liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) offers considerable advantages: speed, selectivity and sensitivity. Two chromatographic...