Optimalizace diagnostických metod oxidačního stresu

Abstract

66 ABSTRAKT Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické botaniky a ekologie Kandidát: Mgr. Miroslava Mercová Konzultant: Ing. Kateřina Macáková, PhD. Konzultant - specialista: doc. RNDr. Miroslav Pohanka, PhD. Název rigorózní práce: Optimalizace diagnostických metod oxidačního stresu Bylo vyvinuto mnoho metod pro detekci oxidačního stresu, ovšem dosud pouze malá pozornost byla věnována jejich optimalizaci pro zacházení se vzorkem. Zpracování vzorku a jeho skladování může mít dopad na stabilitu stanovovaných markerů a tím ovlivňovat získané výsledky. V této práci jsme se zabývali studiem vlivu několika cyklů zmrazování - rozmrazování na stabilitu vybraných markerů oxidačního stresu. Cílem bylo zhodnotit proces opakovaného zmrazování jako potenciální rizikový faktor, který může narušit přesnost měření. Homogenáty tkání potkanů kmene Wistar (mozek, játra, srdce, ledviny, slezina) byly pětkrát zmrazeny (-80 řC) a opětovně rozmrazeny na pokojovou teplotu. Hodnoty TBARS, FRAP, DPPH-testu, hladina redukovaného glutathionu a aktivita glutathion reduktasy byly měřeny po každém cyklu. Naměřená data ukazují změny v hladinách sledovaných markerů. Jejich stabilita byla ovlivněna ve všech testovaných vzorcích, a to již po prvním cyklu. V mnoha případech jsme nalezli mezi počtem...

67 ABSTRACT Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Botany and Ecology Candidate: Mgr. Miroslava Mercová Consultant: Ing. Kateřina Macáková, PhD. Consultant - specialist: doc. RNDr. Miroslav Pohanka, PhD. Title of Thesis: Optimization of oxidative stress diagnostic methods Many methods have been developed to measure markers related to oxidative stress, but only little attention has been paid to their optimization for sample handling. Sample processing and storage can reduce stability of detected markers and therefore influence the results obtained. In this experiment we studied the effect of freezing - thawing cycles on the stability of some oxidative stress markers. The objective was to evaluate the process of repeated freezing as a potential risk factor that can interfere with the precision of measurements. Wistar rat tissue homogenates (brain, liver, heart, kidney, spleen) were frozen (-80 řC) and thawed at room temperature for five cycles. TBARS, FRAP, DPPH-test, GSH levels and GR activity were measured after the every freeze - thaw cycle. The measured data show changes in levels of the assessed markers. Their stability was affected in all of the tested samples, already after the first cycle. In many cases, we found strong linear dependence between...