BRAF mutace u metastazujícího maligního melanomu.

Abstract

Bc. Veronika Hrabcová BRAF mutace u metastazujícího maligního melanomu Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Zdravotnická bioanalytika - Odborný pracovník v laboratorních metodách Cíl práce: Melanom je maligní onemocnění s rostoucí incidencí a v pokročilém stádiu onemocnění s velmi omezenou možností léčby. S pokrokem znalostí v genetice a o tumorigenezi byl u 50 % melanomů pozorován výskyt mutovaného BRAF proteinu. V 80-90 % se jednalo o BRAF V600E mutaci. Cílem práce bylo zavést vhodnou molekulárně biologickou metodu pro diagnostiku mutací v kodonu V600 genu BRAF. Metody: K testování DNA byly použity testy Cobas 4800 BRAF V600 a BRAF StripAssay. Cobas 4800 BRAF V600 test je založen na PCR reakci s použitím TaqMan sond navrženým k wild-type a BRAF V600E mutované sekvenci. BRAF StripAssay test vychází z PCR amplifikace s biotinylovanými primery a následné hybridizaci ke stripům s alelicky-specifickými oligonukleotidovými próbami. Vzorky vyšetřené DNA pocházely od 35 pacientů s pokročilým maligním melanomem z archivu Fingerlandova ústavu patologie Fakultní nemocnice Hradec Králové. Výsledky: Mutace BRAF V600 byla zachycena v přibližně polovině nádorů, což odpovídá výsledkům jiných studií. Ve srovnání metod vyšel lépe test Cobas. Část vzorků byla dle Cobas...

Bc.Veronika Hrabcová BRAF mutations in metastatic malignant melanoma. Diploma thesis Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Healthcare bioanalytics - Specialist in Laboratory Methods Backround: Melanoma is malignant disease with increasing incidency. Treatment of advanced stage of melanoma is still limited. With a progress of knowledge in genetics and tumorigenesis, the incidence of mutated BRAF protein was observed at 50 % of melanomas. In 80-90 % mutated melanomas contain BRAF V600E mutation. The aim of study was to establish a suitable molecular biological method for the diagnosis of mutations in codon V600 BRAF. Methods: Cobas 4800 BRAF V600 mutation test and BRAF StripAssay test were used to analyze DNA. Cobas 4800 BRAF V600 mutation test is based on PCR using TaqMan probes designed for the wild-type and mutant BRAF V600E sequence. BRAF StripAssay test is based on PCR amplification with biotinylated primers and subsequent hybridization of the stripped with allele-specific oligonucleotide probes. Examined DNA samples were derived from 35 patients with advanced malignant melanoma or from archive of laboratory. Results: BRAF V600 mutation was detected in approximately half of the tumors, consistent with the results of other studies. In comparison methods Cobas test...