The role of melatonin in SIRT1 and p-AMPK regulation in HT-29 cell line

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Anastasiya Shkut Školitelé: Mgr. Jana Mandíková, Virginia Motilva Ph.D. Název diplomové práce: Role melatoninu v regulaci SIRT1 a p-AMPK v buněčné linii HT-29. Sirtuin 1 (SIRT1) je na NAD+ závislá deacetyláza vyskytující se v mnoha organismech včetně savců. Bylo zjištěno, že SIRT1 prodlužuje životnost kvasinek v podmínkách s nedostatkem živin. SIRT1 deacetyluje mnohé regulační proteiny a tím kontroluje metabolický stav buňky stejně jako AMP-aktivovaná kináza (AMPK), která je také energeticky regulační enzym závislý na úrovni NAD+ v buňce. Oba enzymy hrají roli v kancerogenezi a mohou ovlivňovat autofágii, i když přesný mechanismus zůstává nejasný. V naší práci jsme se zaměřili na hormon melatonin, který má protizánětlivé a protirakovinné vlastnosti, abychom studovali jeho vliv na lidskou rakovinnou linii buněk tlustého střeva HT-29. Zda melatonin ovlivňuje SIRT1 a AMPK a jaký je mezi nimi hierarchický stav. Také jsme pozorovali možný vliv melatoninu na autofágii. Použili jsme techniku Western blotting (WB) a z našich výsledků se zdá, že melatonin má výrazný efekt na SIRT1, což může aktivovat AMPK a také autofágii. Nicméně některé výsledky neobsahovaly dostatečný počet experimentů, abychom...

Charles University in Prague Pharmaceutical Faculty in Hradec Králové Department of Pharmacology and Toxicology Student: Anastasiya Shkut Supervisors: Mgr. Jana Mandíková, Virginia Motilva Ph.D. Title of diploma thesis: The role of melatonin in SIRT1 and p-AMPK regulation in HT-29 cell line. Sirituin 1 (SIRT1) is NAD+ dependent deacetylase present in wide range of organisms including mammals. It was found to extend life span in yeasts during calorie restriction (CR) conditions. SIRT1 deacetylates many regulator proteins and thus control metabolic status of cell as well as AMP-activated kinase (AMPK), which is also energy regulator enzyme depending on NAD+ levels in cell. Both of them play roles in cancer and could influence autophagy, although the exact mechanism remains unclear. We focused our study on hormone melatonin, which has anti-inflammatory and anti-cancer effects, to study its influence on human colon cancer cell line HT-29. If it has impact on SIRT1 and AMPK and what is hierarchic relationship between SIRT1 and AMPK. Also we observed its possible influence on autophagy. We used Western blotting (WB) technique and from our results it seems that melatonin has significant effect on SIRT1, which might activate AMPK as well as autophagy. Nevertheless some of results did not have sufficient...