Automatizace chemiluminiscenčního stanovení ATP pomocí reakce s luciferázou

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Petra Čechurová Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: Automatizace chemiluminiscenčního stanovení ATP pomocí reakce s luciferázou Diplomová práce se zabývá vývojem metody pro automatizaci chemiluminiscenčního stanovení ATP pomocí reakce s luciferin-luciferázovým systémem. Cílem práce bylo vyzkoušení možnosti nahrazení původně manuální zkumavkové reakce metodou SIA. Analýzy byly prováděny metodou sekvenční injekční analýzy s dvěma způsoby detekce. Byl použit detektor se spirální průtokovou celou a detektor s celou s nekontinuálním průtokem ke sledování reakční kinetiky (odečet hodnot chemiluminiscence byl prováděn v čase 25 a 30 s). Analýzy byly prováděny při dvou dávkovaných objemech vzorku, a to 10 a 20 μl. Pro oba detektory byly naměřeny kalibrace a sestaveny kalibrační závislosti s korelačními koeficienty 0,9994 a 0,9894 pro první detektor a 0,9953; 0,9951 a 0,9982; 0,9972 pro druhý detektor. U opakovatelnosti metody se relativní směrodatné odchylky pohybovaly nejvýše do 6%. Vzorky se známou koncentrací odpovídaly kalibračním závislostem s odchylkami způsobenými pravděpodobně vysokou citlivostí detektoru na okolní světlo. Za stanovených podmínek a za současného provedení byla...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical chemismy Candidate: Bc. Petra Čechurová Supervisor: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D Title of diploma thesis: Automation of chemiluminescence determination of ATP by reaction with luciferase This thesis deals with the development of methods for automating the chemiluminescence determination of ATP by reaction with luciferin-luciferase system. The aim was to test the possibilities to replace the original manual batch method with SIA method. Analyses were performed by sequential injection analysis with two manners of detection. The detector with a spiral flow cell and the detector with a discontinuous flow cell to monitor reaction kinetics (values of chemiluminescence were readed at time 25, and 30 s) were used. Two different volumes (10 and 20 μl) of injected sample were used within the analyses. The calibrations were measured and calibration curves were calcuated with correlation coefficients of 0.9994 and 0.9894 for the first detector and 0.9953, 0.9951 and 0.9982, 0.9972 for the second detector. The repeatability of the method, calcuated as relative standard deviations were ranged up to 6%. The results of samples with known concentration matched the calibration curves with variations probably caused by high...