Candida albicans: Regulace genové exprese - funkce CEK 1

Abstract

4 Abstrakt Eva Procházková Candida albicans: Regulace genové exprese - funkce CEK1 Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové studijní obor Farmacie Cíl práce Tato práce je zaměřená na gen C. albicans zvaný CEK1, na jeho regulace související s velikosti promotoru a vlivem dráhy sterilního vegetativního růstu na genovou expresi této mitogenem aktivované proteinkinázy. Metody K vyhodnocení vysledků bylo použito běžných metod genové manipulace s biologickým materiálem ke konstrukci mutant C. albicans a imunoanalýzy s využitím vhodných protilátek k jejich detekci. K posouzení genové exprese byla použita medota luminescenčního měření za použití luciferázy. Výsledky Exprese CEK1 se zdá být klíčová pro filamentaci kvasinek. Práce tedy spočívá v konstrukci mutant C.albicans, které obsahují oblast pro expresi Cek1. Mutanty s delecí různých genů, podílejících se na činnosti MAPK kaskády byly vystaveny stresovým faktorům jako je působení antimykotika tunikamycinu nebo teploty, a byl sledován vliv jednotlivých mutací na expresi CEK1. Závěry Použité promotory CEK1 umožňují jeho expresi a zvolené mutace zbůsobují rozdílnosti v intenzite genové exprese v závislosti na čase.

5 Abstract Eva Procházková Candida albicans: Regulation of gene expression - function of CEK1 Degree paper Charles university in Prague, Faculty of Pharmacy Hradci Králové Farmacie Background This work is is aimed on CEK1 gene in C. albicans and its regulation related to the promotor of this gene and the influence of sterile vegetative growth pathway on gene expression of this mitogen - activated protein kinase. Methods Common methods of genetic manipulation with biological material and immunoblot assays with different antibodies were used for constructinon of C.albicans mutants and their detection. Luciferase assay, the luminescence method, was used for gene expression measuring. Results CEK1 expression seems to be a key element during the filament growth of C. albicans, the most invasive form of this organism. This research is based on construction of C.albicans mutants containing area of Cek1 expression. Mutants containing deletion of different genes involved in MAPK cascade were exposed to various stress factors like tunicamycine or temperatrure. The effect of those mutations on CEK1 expression was observed. Conclusions Used CEK1 promotors allow the expression of the gene and the mutations used in the work cause differences in intensity of gene expression according to the time.