Modulation of GRKs and beta-arrestins expression by UVB in keratinocyte cell line HaCaT and in epidermis

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Student: Pavlína Rábková Školitel: PharmDr. Miroslav Kovařík, PhD Název diplomové práce: Modulace exprese GRK a beta-arrestinů UVB zářením u keratocytární buněčné linie HaCaT a v epidermis Receptory spřežené s G proteinem (GPCRs) jsou typy receptorů, které slouží k přenosu signálu a ke komunikaci mezi buňkami. Kinázy receptorů spřežené s G proteinem (GRKs) a arrestiny jsou specifické typy receptorů, které jsou chopny desensitizace těchto GPCRs a zároveň tedy ovlivňují přenos signálu k cílovým buňkám a také délku trvání tohoto signálu. Nedávno bylo také objeveno, že tyto specifické proteiny mohou ovlivňovat migraci buněk , podílí se na karcinogenzi a na UV zářením indukované smrti buněk. Typ GPCRs receptorů se nachází také v kůži, která představuje ochranný štít před UV zářením. UV vykazuje silný geotoxický efekt a může způsobovat poškození DNA, mutace a v nejhorším případě může také vést k tvorbě nádorů. Cílem naší práce bylo zjistit, jaký vliv má UV záření na genovou expresi GRKs a beta arrestinu v buněčné linii HaCaT in vitro a v lidské epidermis in vivo. Snažili jsme se také o porovnání různých typů protokolů pro manipulaci s kůží a pro přípravu testovaných vzorků. Pro tuto práci jsme použili...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biological and Medical science Student: Pavlína Rábková Supervisor: PharmDr. Miroslav Kovařík, PhD Title of diploma thesis: Modulation of GRKs and beta-arrestins expression by UVB in keratinocyte cell line HaCaT and in epidermis GPCRs are types of receptors that are used for the transmission and communication between cells. GRKs and β-arrestins are specific proteins, which cause desensitization of GPCR and influence the transmission of signals to the final effecter cells. Recently, it was found out, that these specific proteins can also influence cell migration and play a role in carcinogenesis and UV induced cell death. These types of GPCRs are also observed in skin. The skin introduces a protective shield against UV. UV light has strong genotoxic effects like DNA damage, mutation induction and, in the worst case, causes the growth of tumours. The aim of our work was to determine the influence of UVB radiation on GRKs and β-arrestin gene expression in HaCaT cell lines in vitro and in human epidermis in vivo. We also made efforts to compare different types of preparation of epidermis samples. For this work we used SDS-PAGE, Western blot, Coomassie blue staining and qPCR. We also used the MTT test for determination of...