Detekce a kvantifikace trinitrotoluenu v reálných vzorcích s použitím metody ELISA

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Analytické chemie Kandidát: Lucia Hanusová Školitel v Hradci Králové: PharmDr. Lucie Havlíková Ph.D Školitel v Boloni: Prof. Steffano Girotti Název diplomové práce: Detekce a kvantifikace trinitrotoluenu v reálných vzorcích s použitím metody ELISA 2,4,6-trinitrotoluen (TNT) je široce používaná výbušnina, která je vyráběna od začátku minulého století. Může se vyskytovat jako nečistota v životním prostředí, kontaminuje vodu, vzduch i půdu. Může se akumulovat v rostlinách a rybách, a může ovlivňovat lidské zdraví. Pro získání informací o znečištění životního prostředí, výskytu v lidském organismu nebo určení výbušniny po výbuchu je třeba spolehlivá a citlivá metoda. Proto tyto účely byla na vzorcích z výbuchu testována nepřímá kompetetivní ELISA metoda s chemiluminiscenční detekcí, která byla s úspěchem použita pro detekci a stanovení těchto vzorků. Po extrakci methanolem probíhá imunologická analýza za použití mnoha různých protilátek, nakonec je přidána protilátka značená křenovou peroxidázou a po přidání luminiscenční směsi dojde k vývoji světla, které se vyhodnotí. Metoda prokázala velmi dobrou citlivost, pro naše vzorky se limit detekce se pohybuje v řádu ng/mL [1].

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of: Analytical chemistry Candidate: Lucia Hanusová Supervisor in Hradec Králové: PharmDr. Lucie Havlíková Ph.D Supervisor in Bologna: Prof. Steffano Girotti Title of Diploma Thesis: Detection and quantification of trinitritoluene in real samples by using ELISA method. The 2,4,6-trinitrotoluene (TNT) is a widely used explosive. TNT has been used extensively in the manufacture of explosives since the beginning of last century. It could be found as a contaminant in environment, contaminates air, water and soil. It is accumulated in plants and fishes, and could affect human health. A reliable and sensitive method is needed to get the information about pollution in environment, to detect exposion in human organism or to identify the explosive after explosion. A new rapid method of indirect competitive Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay method with chemiluminescent detection (CL-ELISA) for determination of trinitrotoluene in real samples was successfully applied. The immunological analysis using many antibodies was performed after extraction to methanol (MeOH). The antibody labelled with horse-radish peroxidase was added to reaction and after combination with luminescent mixture the light was developed and we were able to...