Development of LC/MS/MS method for determination of ambrisentan, midazolam and its metabolite in human plasma

Abstract

Vývoj LC/MS/MS metody pro stanovení hladin ambrisentanu, midazolamu a jeho metabolitu v lidské plazmě Diplomová práce Michal Klivický Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Heyrovského 1203, Hradec Králové. Ambrisentan (ABT) je nová účinná látka pro léčbu pulmonální arteriální hypertenze, která je metabolizována cytochromem CYP3A4. Farmakokinetický profil midazolamu (MDL) a jeho hlavního metabolitu 1-hydroxymidazolamu (OH-MDL) se používá jako marker aktivity CYPu 3A4. Simultánní stanovení ambrisentanu, midazolamu a 1-hydroxymidazolamu je výhodné pro studium vlivu indukce či inhibice CYPu 3A4 na farmakokinetiku ambrisentanu. HPLC/MS/MS metoda pro jejich analýzu v lidské plazmě byla vyvinuta a validována. Po extrakci na pevné fázi na SPE koloně Strata-X (Phenomenex) byly analyty separovány na analytické koloně Synergi MAX-RP (150×4.6 mm, 4µm) (Phenomenex) s použitím izokratické eluce a acetonitrilu/5mM ammoniumacetátu 41:59 (v/v) jako mobilní fáze. Pro detekci byla využita tandemová hmotnostní spektrometrie na trojitém kvadrupólu. Ambrisentan-d3, midazolam-d5 a 13 C3-1-hydroxymidazolam byly použity jako vnitřní standardy. Kalibrační křivky byly lineární mezi 2,03 a 150 ng/ml pro MDL (r2 = 0,9993) a OH-MDL (r2 = 0,9987) a mezi...

Development of LC/MS/MS method for determination of ambrisentan, midazolam and its metabolite in human plasma Diploma thesis Michal Klivický Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové, Department of Pharmaceutical Chemistry and Drug Control Heyrovského 1203, Hradec Králové. Ambrisentan (ABT) is a new potent drug for treatment of pulmonary arterial hypertension, which is metabolized by CYP3A4. Pharmacokinetic profile of midazolam (MDL) and its main metabolite 1-hydroxymidazolam (OH-MDL) can be used as a marker of CYP3A4 activity. Simultaneous determination of ambrisentan, midazolam and 1-hydroxymidazolam is advantageous for studying of potential influence of CYP3A4 induction or inhibition on ambrisentan pharmacokinetics. HPLC/MS/MS method for their analysis in human plasma was developed and validated. After solid phase extraction on a Strata-X (Phenomenex) SPE column, the analytes were separated on a Synergi MAX-RP (150×4.6 mm, 4 µm) (Phenomenex) analytical column using isocratic elution with acetonitrile/5mM ammonium acetate 41:59 (v/v) as a mobile phase. Detection was achieved using tandem mass spectrometry on a triple quadrupole mass spectrometer. Ambrisentan-d3, midazolam-d5 and 13 C3-1-hydroxymidazolam were used as internal standards. The calibration curves were linear...