Sledování interakce pesticidu s acetylcholinesterasou za použití biosenzoru

Abstract

SLEDOVÁNÍ INTERAKCE PESTICIDU S ACETYLCHOLINESTERASOU ZA POUŽITÍ BIOSENZORU Oto Drobík Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Organofosforové a karbamátové pesticidy jsou toxické látky užívané v zemědělství jako insekticida. Pro člověka jsou tyto látky velmi toxické a akutní otrava může vést až k úmrtí, protože dochází k inhibici acetylcholinesterasy, což vede k nadměrné kumulaci acetylcholinu v organismu. V rámci diplomové práce byl připraven funkční biosenzor, pro který byl použit standardní tříelektrodový amperometrický senzor vyrobený sítotiskem. Byly testovány senzory s platinovou a uhlíkovou pracovní elektrodou. Dále byla vybrána vhodná metoda elektrochemické detekce, byly optimalizovány některé reakční podmínky a vyhodnoceny kinetické parametry enzymové reakce. Také byly testovány a porovnány různé metody imobilizace acetylcholinesterasy k senzoru a byla vyhodnocena jejich úspěšnost. Jako zástupce pesticidů byly vybrány vzorky paraoxon-methyl a diisopropylfluorfosfát. Byla stanovena mez detekce pro oba pesticidy, která se pohybovala v rozmezí 10-6 - 10-5 mol/l. Pro ověření správnosti získaných výsledků byla rovněž provedena i kontrola pomocí spektrofotometrického stanovení Ellmanovou metodou.

FOLLOWING OF ACETYLCHOLINESTERASE-PESTICIDE INTERACTION USING BIOSENSOR TECHNOLOGY Oto Drobík Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Drug Control Organophosphorus and carbamate pesticides are toxic substances used in agriculture as insecticides. These substances are highly toxic for humans as acute poisoning can lead to death via inhibition of acetylcholinesterase. After acetylcholinesterase inhibition, accumulation of acetylcholine follows. In compliance with the thesis aims, functional electrochemical biosensor was constructed. It was based on a standard screen printed amperometric sensor with three electrodes. Herein sensors with platinum and carbon working electrode were tested. Suitable method of electrochemical assay was chosen and some the basic conditions were optimized. Kinetic parameters of enzyme reaction were assessed, too. Various methods of acetylcholinesterase capturing onto sensor were tested and compared one to each other. Paraoxon-methyl and diisopropylfluorophosphate were chosen as the representative of pesticides. Limit of detections for the both pesticides were estimated to be 10-6 - 10-5 mol/l. The prepared biosensors were compared with the standard Ellman's method based on spectrophotometry and the...