Stanovení kyseliny askorbové s využitím metody HILIC - porovnání HILIC stacionárních fází

Abstract

Tato diplomová práce byla zaměřena na stanovení kyseliny askorbové (AA) metodou Hydrophilic Interaction Chromatography (HILIC) a porovnání HILIC stacionárních fází. Stanovení probíhalo za použití tří typů detekce. Pro optimalizaci metody byla použita ultrafialová (UV) detekce. Pro stanovení AA a DHA (kyselina dehydroaskorbová) na jednotlivých stacionárních fázích byly použity detektory na bázi aerosolu Charged Aerosol Detector (CAD) a Nano Quantity Analyte Detector (NQAD). V rámci optimalizace metody byly zjišťovány vhodné podmínky stanovení AA a DHA. Vodnou složku mobilní fáze tvořila ultračistá voda, kyselina octová nebo octan amonný o rostoucí síle pufru a různé hodnotě pH. Organickou složkou byl acetonitril. Během optimalizace byl sledován vliv postupné změny koncentrací vodné a organické složky. Porovnávanými stacionárními fázemi byly Atlantis T3 a fáze vyvinuté speciálně pro stanovení metodou HILIC - Luna HILIC a ZIC-HILIC. V případě kolon Luna HILIC a Atlantis T3 nedošlo k oddělení obou analytů od mrtvého retenčního času. Na koloně ZIC-HILIC došlo k separaci analyzovaných látek, píky však byly příliš široké a nesymetrické. Žádná z uvedených kolon tedy nebyla vyhodnocena jako vhodná pro stanovení AA a DHA. Součástí této diplomové práce bylo také ověření vhodnosti použití detektoru Corona CAD....

This thesis was focused on the determination of ascorbic acid (AA) using Hydrophilic Interaction Chromatography (HILIC) approach and the comparison of HILIC stationary phases. Determination was carried out using three types of detection. To optimize the method ultraviolet (UV) detection was used. For the determination of AA and DHA (dehydroascorbic acid) on different stationary phases aerosol based detectors Charged Aerosol Detector (CAD) and Nano Quantity Analyte Detector (NQAD) were used. During method optimization suitable conditions for the determination of AA and DHA have been defined. Aqueous part of the mobile phase was formed by water, acetic acid or ammonium acetate buffer of increasing strength and different pH. Organic part was formed by acetonitrile. During the optimization the influence of gradual changes of water and organic part has been monitored. Compared stationary phases were Atlantis T3 and those specially developed for the determination by HILIC method - Luna HILIC and ZIC-HILIC. In the case of Luna HILIC and Atlantis T3 both analytes were not separated from the dead retention time. On ZIC-HILIC column separation of substances occurred, but peaks were too broad. None of these columns has been evaluated as suitable for the simultaneous determination of AA and DHA. A part of this...