Studie faktoru teploty při HPLC gradientové a isokratické separaci

Abstract

4 Abstrakt Tato diplomová práce byla zaměřena na studii vlivu teploty na analýzu fenolických kyselin a flurorochinolonových antibiotik při analáze vysoko účinnou kapalinovou chromatografií. Analýza probíhala na chromatografické koloně Zorbax SB C 18 (50 x 4,6 mm; 1,8 µm) za použití ultrafialové (UV) detekce. V rámci optimalizace metody byly zjišťovány vhodné podmínky pro separaci fenolických kyselin a fluorochinolonových antibiotik. Byl sledován vliv složení a koncentrace vodné složky mobilní fáze a především vliv teploty. Při analýze fenolických kyselin byla použita gradientová eluce. Mobilní fáze se skládala z 0,1% roztoku kyseliny mravenčí a metanolu. Analýza fluorochinolonových antibiotik probíhala isokraticky a mobilní fáze byla složena též z 0,1% roztoku kyseliny mravenčí a metanolu. Základním cílem této diplomové práce bylo s pomocí zvýšené teploty urychlit analýzu a tím ušetřit čas a zároveň i použitá rozpouštědla tvořící mobilní fázi. Při analýze fenolických kyselin byl tento předpoklad splněn a při vyšších teplotách došlo k výraznému urychlení analýzy při dobrém rozlišení jednotlivých píků. Naopak nižší teplota než laboratorní byla příznivá pro analýzu fluorochinolonů. U metod pro fenolické kyseliny i pro fluorochinolonová antibiotika byly provedeny testy způsobilosti systému nástřikem roztoku...

5 Abstract This thesis was focused on the determination of the temparature influence upon analysis of phenolic acids and fluoroquinolone antibiotics using high performance liquid chromatography. Analysis was performed on Zorbax SB C18 (50 x 4.6 mm; 1.8 µm) analytical column using ultra - viollet detection (UV) for both phenolic acids and fluoroquinolon antibiotics. The optimization of separation conditions was carried out for determination of phenolic acids and fluoroquinolone antibiotics. The effect of composition and concentration of aqueous part of mobile phase and especially the effect of temperature was investigated. The gradient elution was used for determination of phenolic acids. The mobile phase was formed by 0.1% formic acid and methanol. The isocratic elution was used for determination of fluoroquinolone antibiotics and the mobile phase was also formed by 0.1% formic acid and methanol. Accelerating of analysis and saving time and used solvents by using higher temperature were the main goals of this thesis. This premise came true in the analysis of phenolic acids. The analysis was faster with good peak resolution. The results for fluoroquinolone antibiotics were not better than basic 25žC measurement. Contrariwise, lower than laboratory temperature was more advantageous for their analysis. System...