Stanovení aktivit peroxidas a jejich porovnání u různých helmintů

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Lenka Sulanová Školitel: Doc. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení aktivit peroxidas a jejich porovnání u různých helmintů Cílem diplomové práce bylo vyhledat v dostupné literatuře jednoduché metody pro stanovení peroxidas, vybranou metodu zavést, optimalizovat a porovnat s metodou na pracovišti již používanou. V metodě, kterou jsem zvolila, byl jako substrát využíván 3,3′,5,5′- tetramethylbenzidin (TMB). Tuto metodu jsem optimalizovala a porovnávala s dříve používanou metodou se substrátem O-fenylendiaminem dihydrochloridem (OPD). Metoda s použitím TMB je přesnější, komfortnější, ale finančně náročnější než metoda s OPD. Obě metody jsem následně využila na stanovení aktivit peroxidas v subcelulárních frakcích dvou druhů helmintů: motolice kopinaté a vlasovky slézové. Zjistila jsem, že aktivity peroxidas jsou vyšší u vlasovky slézové než u motolice kopinaté. Rozdílné aktivity peroxidas vykazovaly subcelulární frakce u kmenů vlasovek citlivých a rezistentních na anthelmintika. Při ex vivo kontaktu motolice s anthelmintiky (albendazol a albendazolsulfoxid) došlo k ovlivnění aktivity peroxidas. Z testovaných inhibitorů peroxidas působil inhibičně na peroxidasy helmintů...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Lenka Sulanová Supervisor: Doc. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Title of diploma thesis: The assay of peroxidases activities and their comparison in various helminths The aim of diploma thesis was to search for simple methods for determination of peroxidases activities, to choose a suitable method, optimize it and compare it with the method used in the workplace. The 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB) has been used as a substrate in selected technique. I have optimized this method and compared it with the formely applied method using substrate O-phenylenediamine dihydrochloride (OPD). Method working with TMB is more precise, more comfortable but more expensive than method using OPD. I have applied both of methods for assay of peroxidases activities in the subcellular fractions of the two species of helminths: Dicrocoelicum dendriticum and Haemonchus contortus. I found out that activities of peroxidases are higher at Haemonchus contortus than at Dicrocoelicum dendriticum. Different activities of peroxidases were observed in the subcellular fractions of the Haemonchus contortus strains sensitive and resistant to anthelmintics. The ex vivo contact of Dicrocoelicum dendriticum with...